刘 棣，张寅斌，闫婉君，赵小瑶，盛倩文，许 朋，管海涛，张淑群

(西安交通大学第二附属医院肿瘤科，陕西西安 710004)

乳腺癌的全球发病率在女性患者恶性肿瘤发病中居首位，是常见的恶性肿瘤[1]。三阴性乳腺癌是乳腺癌中较特殊的类型，缺少激素受体、表皮生长因子受体表达，侵袭转移能力较强，恶性程度高，目前缺乏有效的治疗手段[2-4]。因此，需要进一步研究三阴性乳腺癌的发病机制及生物学行为，寻找新的靶点。近年来，对乳腺癌发病机制的研究转向了微小RNA(microRNA, miRNA)，它是非编码的单链RNA，含有18～25个核苷酸序列，在人类发育、细胞增殖、凋亡及激素分泌等多种生理过程发挥重要作用。研究表明，miR-200在多种肿瘤中异常表达[5-6]，而对于其在乳腺癌中的作用及功能机制仍存在争议[6-7]。本研究通过检测miRNA-200b在各种分子分型乳腺癌细胞中的表达，以及它对三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭等能力的影响，探讨miR-200b在三阴性乳腺癌发生、发展过程中的可能作用机制。

1 材料与方法

1.1细胞株及试剂人乳腺癌细胞株MCF-7、BT-474、MDA-MB-453、SKBR3、MDA-MB-468、MDA-MB-231来自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；RPMI 1640培养基为Hyclone公司产品，miR-200b mimics、miR-200b inhibitor、negative control来自Dharmacon公司；引物由华大基因公司合成，RT-PCR相关试剂来自TaKaRa公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养及RNA提取 在含100 mL/L小牛血清的RPMI 1640培养基中进行细胞培养。采用Trizol提取总RNA。

1.2.2定量PCR检测乳腺癌细胞miR-200家族表达量 定量PCR采用SYBR试剂盒进行。反应体系50 μL，95 ℃ 5 min, 95 ℃ 10 s, 60 ℃ 20 s, 72 ℃ 20 s, 78 ℃ 20 s，共40个循环，收集反应数据。U6 snRNA作为内参。

1.2.3细胞转染 因为既往对miR-200b的研究不甚清楚，所以选取miR-200家族中的miR-200b进行实验。……