邓海静，王 瑾，侯晓丽，高学敏，杨 方

(1. 华北理工大学基础医学院；2. 河北省慢性疾病重点实验室； 3. 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室，河北唐山 063000)

一次性支气管灌注二氧化硅(SiO2)粉尘致大鼠硅肺纤维化后，硅结节内会出现很多具有更强收缩、迁移和分泌细胞外基质能力的肌成纤维细胞，这些肌成纤维细胞是硅肺发生时的主要效应细胞。本课题组前期研究发现，这些α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)表达阳性的肌成纤维细胞可以来自于肺内固有的成纤维细胞[1]，而有文献报道支气管和肺泡的上皮细胞是肌成纤维细胞的另一重要的细胞来源[2]，并且课题组体外实验研究也发现A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞株在TGF-β1诱导下能成功向间质细胞(肌成纤维细胞)的转化[3]。而在硅尘所致的硅肺纤维化中是否存在上皮-间质转化现象，尚未见相关文献报道。本实验拟采用大鼠体内一次性支气管灌注SiO2粉尘，观察矽尘所致的硅肺纤维化发生发展过程中硅结节的形成及硅结节中是否存在上皮-间质转化现象，以阐明(硅)肺纤维化发生的病理生理机制。

1 材料与方法

1.1实验动物及主要试剂SPF级雄性成年Wistar大鼠(动物许可证SCXK京20090003，北京维通利华动物公司)；α石英粉尘(中国疾病预防控制中心)；药物微量释放泵(Alzet 2 mL，美国DURECT Corporation)；鼠α-SMA多克隆抗体(1184-1，EPITOMICs)；兔vimentin多克隆抗体(2707-1，EPITOMICs)；兔E-cad多克隆抗体(ZS-7870，北京博奥森)；兔SP-A多克隆抗体(EL925092, Eterlife, UK)；兔多克隆抗体Ⅰ型胶原(BA0325, Gene Tex)；兔多克隆抗体GAPDH、鼠单克隆抗体β-actin(SC-25778, SC-17778, Santa Cruz)；SP免疫组织化学试剂盒(SP-9001，北京中杉金桥)；BCIP/NBT显色试剂盒(E-116, Amresco)；……