李春阳 周兰影 贾俊

近年来，伴随着我国经济的飞速发展以及科学技术的日益进步，水果和蔬菜的种植面积也在不断扩大，实现四季种植。蔬菜和水果的生产者为了提高种植效益，在种植过程中应用了各种农药，以至于蔬菜和水果中农药残留的问题日益严峻，受到了社会各界的高度重视，因此相关部门必须高度重视蔬菜和水果的质量安全监管和检测工作。近年来，我国为了提高农产品质量安全的检验检测水平，陆续颁布了一系列国家标准和行业标准的分析方法，在一定程度上推动了蔬菜和水果残留农业检测技术的发展。但是因为蔬菜和水果种类繁多，样品基质复杂，存在很多色素干扰物质，基质对农药残留分析物有明显干扰，这些均在一定程度上影响了农药残留的检测，因此对检测技术提出了更高要求。高效液相色谱-串联四级杆质谱（HPLC- MS- MS）联用技术作为近几年才出现的一类新型分离分析技术，该项技术实现了高效液相色谱技术对复杂样品的高分析能力与质谱技术具备的高选择性和高灵敏度以及可以提供相对分子质量和结构信息等优势充分结合起来，被广泛应用在食品分析、药物分析、环境分析等领域中。本文以蔬菜和水果中的残留农药多菌灵为例，探讨了高效液相色谱-串联四级杆质谱联用技术在蔬菜和水果中残留农药成分检测中的效果。

实验部分

所需仪器和试剂

（1）所需仪器。次实验所需的仪器选择由Agient科技有限公司生产的6460型高效液相色谱-串联四级杆质谱联用仪，同时配备四元低压泵、二极管列阵检测器、电喷雾四级杆质谱检测器、在线脱气机、柱温箱、自动进样器、仪器控制，关于数据的采集主要应用数Data Acquisition工作站；由长春莱博帕特科技发展有限公司提供的超纯水系统；由昆山市超声仪器有限公司提供的KQ- 502DE系列超声波清洗器；由上海亚荣生化仪器公司提供的RE-52AA型旋转蒸发仪；由Dr.Ehrenstorfer公司提供的多菌灵标准品。

（2）所需试剂。本次所需试剂有：甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、甲苯（色谱纯）、甲酸（分析出），氯化钠、氢氧化钠、石油醚（沸程30～60℃）、二氯甲烷、无水硫酸钠（在使用前需要将其置于500℃的马弗炉中灼伤4个小时），盐酸（分析纯）、0.8～1.6mg/mL的农药标准储备液（纯度不低于95%），将其置于4℃的环境中待用。

样品制备

（1）试样。根据2018年国家食品污染物和有害因素风险监测计划项目，30份样品主要来源本地区超市和农贸市场的蔬菜水果，包含茄子、黄瓜、白菜、青椒、苹果、桃子、超，草莓等。本次实验选择样品为苹果、白菜、青椒。

（2）配制标准溶液。准确称取多菌灵的标准品，将其溶解于甲醇溶液中配制成浓度为100mg/L的标准储备液，在使用时，需要应用甲醇逐渐将其浓度稀释至0.020～20mg/L的标准溶液。

（3）样品预处理。称取20.00g粉碎并混合均匀的苹果、白菜、青椒样品，将其置于250ml的锥形瓶中，在瓶中加入甲醇50ml和0.1mol/L盐酸10ml中，将其充分搅拌后，超声振荡提取2小时，然后再应用布氏漏斗抽滤，并用少量的甲醇清洗残渣，将清洗液合并滤液一起装在150ml的圆底烧瓶中，将其置于40℃水浴上浓缩，将甲醇除去。将浓缩后的样品液转移到容积为125ml的分液漏斗中，加入0.1mol/L盐酸10ml和10%的氯化钠溶液50ml，将其充分混合均匀后，再加入25ml石油醚剧烈摇晃。摇晃均匀后待其静置分层后，将石油醚去掉，加入2mol/L氢氧化钠将溶液的酸碱度调制6.5～8.5，在应用二氯甲烷萃取三次，每次约20ml。将萃取后的溶液应用无水硫酸钠进行干燥，把滤液转移到容积为150ml的圆底烧瓶中，将其置于温度为40℃的水浴中减压蒸发到干，最后在应用甲醇溶解定容到1ml即可。

（4）高效液相色谱-质谱条件。色谱条件：色谱柱，Agient ZORBAX SB- C18（2.1.×100mm，3.5μm）；流动相，4%四氢呋喃水溶液（A）和甲醇（B）的比值为7∶3；流速设置为0.3mL/Min。

质谱条件：正离子主要选择ESI（+）模式，选择M/z192和m/z132作为定性检测离子对，定量检测离子为m/z192和m/z160，干燥气选择氮气，流速控制在10L/min，裂解电压为100伏特，毛细管电压为3500伏特，干燥温度为350℃。

结果和讨论

蔬菜水果中残留农药检测中特定离子的选择。在检测蔬菜水果中的残留农药时，首先需要应用质谱扫描法，扫描蔬菜水果残留农药的不同种类农药标准品，并从中获得具有特征的离子，然后再获得相关的母离子、定量子离子以及定性离子。因为本次实验主要检测蔬菜水果中的多菌灵，这类农药属于两性化合物，其在偏碱性和中性的水溶液中溶解度高，在乙酸乙酯、丙酮、氯仿等有机溶剂中微溶。本次研究主要采用空白蔬菜，首先加入多菌灵标准溶液，然后在分别用水和甲醇提取，操作方法与上文相同。结果发现甲醇-盐酸法的回收率远远高于水提法的回收率，因此在本次实验中选择醇提取法。具体操作如下：将盐酸加入至甲醇中，让多菌灵成盐，然后在加入石油醚将脂溶性物质除去，再加入氢氧化钠溶液，将酸碱度调节至6.5～8.5，将多菌灵还原成原形，最后再加入有机溶剂萃取，如此便可以获得纯化、富集多的多菌灵。

流动相的选择。本次实验中发现采用甲醇-水作为流动相脱洗时，多菌灵的峰型较宽并且拖尾，在经反复试验后，调节剂选择浓度为40%四氢呋喃，四氢呋喃水溶液（A）和甲醇（B）的比值为7∶3，并且这种方法配置简单，对环境污染小，重现性好。

优化质谱方法。在本次实验中，发现应用DAD检测器在紫外线波长为282纳米的环境下检测时，多菌灵的信号被掩盖，因此无法实现准确定量的目的。但是如果选择质朴检测器在选择离子检测模式下检测，多菌灵的响应明显，并且采用SIM质谱检测模式后，极大地提高了检测灵敏度，被检测物在紫外光下无响应，但是在质谱中响应较强。并且质谱抗干扰能力强，检出限低，定量结果更加真实和准确。在质谱中的准分离子m/z192[M+H]+为基峰，m/z214为[M+ Na]+，m/z160为[M- CH3O]+，对此在本次实验中最主要选择m/z192和m/z160定量测量多菌灵，用m/192和m/z132进行定性分析。

標准曲线和方法检出限分析。应用甲醇稀释液将标准储备液分别稀释成浓度为0.02mg/ L、0.04mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/ L、0.8mg/L、1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L的标准溶液。在保证色谱和质谱条件完全相同基础上，对多菌灵的峰面积进行测定，根据多菌灵的峰面积对开展样浓度作图，绘制出标准校正曲线。在浓度为0.02～4mg/L的范围得到标准曲线，采用如下线性回归方程计算：

样品检测结果。本次测定的样品的结果如表1所示，多菌灵的平均加样回收率为95.5%～103.2%，最大相对偏差为4.3%，检测结果满意。不同检测样品中的多菌灵最高残留限量为0.5mg/kg，由此证实高效液相色谱-串联四级杆质谱联用检测方法符合分析要求。

日常食品是否安全，在很大程度上与食品使用的农药残留污染有关，因此社会各界越来越重视残留农药的检测工作。高效液相色谱-串联四级杆质谱联用技术作为一项先进的技术，将其运用在蔬菜和水果中残留药物的检测中，具有较大的优势。从上述高效液相色谱-串联四级杆质谱联用在蔬菜和水果中残留多菌灵的检测中可以看出，高效液相色谱-串联四级杆质谱联用技术可以迅速的检测出蔬菜水果中的多菌灵，同理可证还可以用于检测蔬菜水果中其他种类的残留农药，具有较高的精密度和灵敏度，充分的满足了不同种类残留农药的检测，从而为科学的控制农药用量，栽培无公害蔬菜水工提供了技术指导，充分保证了农产品的质量安全，降低了农产品安全事故的发生率，保证了广大消费者身心健康。总之，高效液相色谱-串联四级杆质谱联用技术具有简单快捷、定量准确优点，可满足多种蔬菜水果的残留农药检测要求。