马廷廷 张漫 朱佳妮 王卫卫 刘杰 谈飞

266003， 青岛大学附属医院口腔修复科

PEGDA凝胶的内部结构与天然细胞基质(ECM)相似，已被广泛应用于生物医学领域[1-2]。但因其本身的生物惰性，导致细胞在凝胶表面难以粘附。随着研究的深入，诸多学者发现材料表面负电荷可以促进细胞在材料表面的粘附。甲基丙烯酸磺酸钠(SMAS)是含有稳定负电荷的小分子，能够保证修饰后材料表面的电量。本研究用不同浓度的SMAS修饰PEGDA凝胶，研究材料表面电荷对细胞增殖和分化的影响。

1 材料与方法

1.1 SMAS修饰凝胶的制备

载电凝胶的制备见表 1。将凝胶前体溶液混匀后滴至无菌玻璃板上，用365 nm紫外线光固化灯照射15～20 min使其完全固化，制成样品，每组6 块。

表 1 不同浓度SMAS修饰凝胶的制备

1.2 SMAS修饰凝胶的化学结构分析

将样品冻干24 h，利用红外光谱 FTIR分光仪分析不同浓度SMAS修饰的 PEGDA 凝胶化学结构的变化，得出SMAS接枝量的差异。

1.3 SMAS修饰凝胶的Zeta电位测定

将各组样品于三蒸水中浸泡48 h，用研钵将溶胀的凝胶研磨成细小颗粒，37 ℃真空干燥过夜，各组称取5 mg，重新溶解至三蒸水，混匀后利用Zeta电位仪测量各组凝胶Zeta电位。

1.4 细胞增殖情况测定

常规培养MC3T3-E1细胞，将MC3T3-E1细胞悬液以1×105密度接种于凝胶表面。在1、 3、 5 d用CCK8法，记录各组样本A值。

1.5 细胞ALP活性的影响

细胞在凝胶表面诱导培养后，分别于7、 10、 14 d， 利用ALP检测试剂盒检测各组细胞的ALP活性。

1.6 细胞成骨分化相关基因检测

在各组凝胶表面接种细胞。待细胞覆盖凝胶表面95%时，换成骨诱导培养基。分别于7、 14、 21 d， 提取各组样本RNA，采用qRT-PCR检测成骨相关基因表达水平。……