程胖，刘博，冯潇，魏金花，马斌芳，李臻

（第四军医大学人体解剖与组织胚胎学教研室，西安，710032）

附睾作为精子成熟与贮存的场所，其特定的管腔酸性微环境对精子的成熟至关重要，而附睾上皮细胞可以通过多种酸碱转运体调节水分、HCO3-的重吸收和质子的分泌，共同维持附睾管腔酸性微环境的平衡[1,2]。组成附睾上皮的细胞类型主要包括分布于整段附睾的主细胞、基细胞和具有区段特异性的亮细胞、狭窄细胞及少量的顶细胞等，主细胞数量约占所有附睾上皮细胞的80%，是附睾上皮中最主要的细胞类型[3]。附睾上皮细胞体外培养，有利于附睾上皮的功能研究深入。本实验采用酶消化法和组织块法对大鼠附睾上皮细胞进行了原代培养，然后对细胞进行了纯化并和鉴定，最后检测了相关分子如雄激素受体（androgen receptor, AR）和雌激素受体α（estrogen receptor α, ERα）在原代培养的附睾上皮细胞的表达情况。通过对两种培养方法的观察、比较，我们筛选出了更适合、有效的培养方法，从而为体外研究附睾上皮细胞的功能奠定了基础。

材料与方法

1 实验动物

健康雄性SD大鼠，4～5周龄，由第四军医大学实验动物中心提供。

2 主要试剂

MEM培养基（Gibco公司），胎牛血清（Hyclone公司），5α-DHT、丙酮酸钠（sigma公司），无Ca2+、Mg2+的PBS，胰蛋白酶（Gibco公司），I型胶原酶（Gibco公司），兔抗Clusterin多克隆抗体（Novus公司），兔抗AR多克隆抗体（Santa Cruz公司）和兔抗ERα多克隆抗体（Abcam公司），Alexa488标记羊抗兔IgG（Invitrogen公司），生物素标记的羊抗兔IgG（中杉金桥）。

3 大鼠附睾的采集

用2%戊巴比妥钠麻醉4～5周龄的SD大鼠，消毒腹部，打开腹腔，无菌条件下取双侧附睾组织，置于无Ca2+、Mg2+的含青-链霉素双抗的PBS中,充分漂洗。……