林翠英，林杨元，张趁华，刘黎星，王守安

(莆田学院基础医学部，莆田，351100)

在雌性哺乳动物的生殖活动中，孕酮是一种十分重要的性激素，也是早胚发育的关键因素。孕酮膜受体(membrane progestin receptors, mPRs)能使孕酮产生快速非基因组效应。它们属于类孕激素和脂联素分子受体(progestin and adipoQ receptors，PAQRs)家族，存在于细胞膜上，通过调节膜腺苷酸环化酶的活性引起细胞内 cAMP 的水平变化，而产生相应的效应[1,2]。本研究通过检测mPRs在小鼠子宫、输卵管和卵巢的定位及表达，为进一步探讨其在早胚发育中的作用提供实验依据。

材料和方法

1 实验动物和材料

昆明雌鼠(6～8w) 购自吴氏实验动物研究中心，饲养3～5d，调节生理周期，使其适应环境。抗小鼠mPRs多克隆抗体(Santa Cruz)；S-P超敏试剂盒KIT-9701内含A液B液C液D液(迈新试剂公司)；免疫组织化学摄像系统(Olympus)。TRIZOL试剂、无RNA酶的糖原、SuperScriptTM III reverse transcriptase、5× RT 缓冲液（Invitrogen Life Technologies），RNA酶抑制剂（Epicentre），2.5mmol/L dNTP混合液（dATP，dGTP，dCTP和 dTTP各 2.5mmol/L）（HyTest Ltd），2× PCR master mix（Arraystar），Gene Amp PCR System 9700（Applied Biosystems），Primer（英骏生物技术有限公司），QuantStudio™ 5 System (Applied Biosystems)，Gene Amp PCR System 9700（Applied Biosystems）。

2 免疫组织化学检测mPRα、mPRβ和mPRγ 蛋白质表达

取6～8w昆明雌鼠以颈椎脱臼法处死小鼠，迅速取出子宫、输卵管和卵巢，置于10%中性缓冲福尔马林中固定过夜，常规脱水、石蜡包埋，制成5μm 厚切片。烤好切片常规脱蜡入水，柠檬酸抗原修复：A液10min、B液15min，4℃一抗过夜，C液10min、D液10min，DAB显色8min，苏木素复染7min，脱水、吹干封片。对照采用PBS 取代一抗，其余步骤同上。

3 实时定量PCR分析mPRα、mPRβ和mPRγ的mRNA表达

取6～8w昆明雌鼠阴道涂片区分动情期和动情间期，以颈椎脱臼法处死小鼠，迅速取出子宫、输卵管和卵巢，TRIzol 法提取总RNA，进行逆转录合成cDNA，实时定量PCR 分析分析mPRα、mPRβ和mPRγ的mRNA表 达， 并 以ACTB(-MOUSE) 基因为内参照。引物序列如下：ACTB(247bp) ，F-5’ GTACCACCATGTACCCAGGC3’，R-5’ AACGCAGCTCAGTAACAGTCC3’；……