王晓妤，穆玉明，麦培培，史 琪，狄 敏，黄伟良，关丽娜

(新疆医科大学第一附属医院心脏超声诊断科，新疆 乌鲁木齐 830011)

超声联合靶向微泡和药物溶栓治疗是目前的研究热点，其中将靶向配体或溶栓药物与微泡进行单负载结合的研究[1-3]较多，而将靶向配体和药物同时与微泡结合，从而制备具有血栓靶向且携带药物的双负载靶向超声微泡者较少。本研究拟应用生物素—亲和素系统(biotin-avidin system, BAS)桥接法将血栓靶向配体[精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸片段(Arg-Gly-Asp-Ser segments, RGDS)]及重组织纤溶酶原激活物(rt-PA)与超声微泡进行连接，制备RGDS/rt-PA双负载靶向微泡，分析其物理特性、药物负载量、声学显像特征及其对富血小板血栓(platelet-rich thrombus, PRT)的靶向性和溶栓作用。

1 材料与方法

1.1 制备微泡造影剂

1.1.1 制备RGDS、rt-PA单负载微泡 对rt-PA(BOC Sciences)和RGDS(上海子起生物科技有限公司特约合成)进行生物素化(Thermo)及荧光标记，以异硫氰酸荧光素(FITC)标记rt-PA，产物呈黄绿色荧光；以5-羧基四甲基罗丹明(5-TAMRA)标记RGDS，产物呈橙红色荧光。将RGDS及rt-PA分为5个剂量单位(1.25、0.25、0.125、0.062 5、0.031 25 mg)，分别与200 μl Targestar-SA超声微泡(Targesom)混匀，避光常温孵育0.5 h后，采用浮选法重复洗涤2次[4]。然后对配制好的标本进行理化性质等检测压片，置于荧光正置显微镜(Olympus BX53)下观察标记情况，以流式细胞仪(BD)检测表达荧光微泡占总微泡的比例，分析微泡与配体的结合率，获得单负载微泡的最佳结合剂量。

1.1.2 制备RGDS/rt-PA双负载靶向微泡 将RGDS及rt-PA以单负载最佳结合剂量连接在微泡上，制成双负载微泡，配体加入顺序分为3种：①先加RGDS，再加rt-PA；②先加rt-PA，再加RGDS；③将RGDS及rt-PA混匀后加入。……