张越 栾鑫超 侯殿雅 于丽莉 徐亚维 楚海娇

【摘 要】 本研究人工设计合成了具有SOD和GPx氨基酸一级序列的小肽，将目的蛋白中活性部位的化学修饰位点设计成Cys，同时将其它位点的Cys变成不影响结构的其他氨基酸获得人工合成的76个氨基酸的抗氧化肽序列，尝试利用E.coli的营养缺陷型表达系统进行76肽模拟物的表达，并对表达的肽活性进行鉴定，预期为抗氧化模拟物的研究提供一些理论参数。

【关键词】 双酶蛋白制备；蛋白表达；活性分析

[Abstract] In this study the artificial design was synthesized with SOD and GPx amino acid sequence of small peptide， the active site of target protein modification sites designed Cys， at the same time will not affect the structure of other sites of Cys become available from other amino acids 76 synthetic antioxidant peptide sequence of amino acids， and try to take advantage of e.c. with our fabrication： oli auxotroph expression system for the expression of 76 peptide analogues， and the expression of peptide activity appraisal， expectations for oxidation of simulation study provides some theoretical parameters.

[Key words] double enzyme protein preparation； protein expression； activity analysis

天然抗氧化酶稳定性差、来源受限且分子量较大等缺点一直限制其在各个领域的实际应用。由于抗氧化酶对维持正常生命活动的重要性，使得科学家们一直在利用模拟手段去设计并改造天然抗氧化酶，以便阐明酶催化反应机理和提高其实际应用价值。但机体内的抗氧化酶是通过协同作用来维持该系统平衡的，且进程也复杂多变，因此，对于单一功能酶的研究和模拟显然不能深入理解这个复杂的抗氧化酶系统，开展具有抗氧化能力的多功能酶的模拟势在必行[1]。

在此之前，我们利用近几年的时间对具有SOD和GPx活力的模拟酶进行了一部分研究，以SOD和GPx序列为基础，基于模块酶的设计理念，我们构建了一个具有谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶雙酶活性的含硒65肽，但由于其分子量较大，很难进入细胞内发挥作用。故此，我们在此65肽的氨基端连接上人免疫缺陷病毒反式转录激活因子的蛋白穿膜结构域的氨基酸序列，即细胞穿膜肽，使其具有穿透生物膜的能力，获得76肽模拟物，并在大肠杆菌中成功融合表达，再通过硒化，得到了具有SOD和GPx活力的模拟酶。……