文 / Katrin Töpner & Dr Dirk Hansen& Dr Elmar Herbig

适用于HPLC-SEC分析的超纯水 // 高效液相色谱（HPLC）是一种进行物质分离、鉴定和定量的分析方法。与其它通常采用梯度模式的各种生物聚合物HPLC（离子交换、疏水相互作用和反相色谱）不同，SEC（尺寸排阻色谱法）通常采用等度方法。

尺寸排阻色谱法

尺寸排阻色谱法（SEC）包括凝胶渗透色谱法（GPC）和凝胶过滤色谱法（在含水条件下实行的一种特殊SEC法），是利用球形颗粒多孔基质作为固定相的一种分析方法。小分子能够渗透到筛孔中并被截留。与此相反，大分子则不能进入筛孔，只能以线性流速通过色谱柱。因此，分子根据其大小进行分离，大分子先从色谱柱中洗脱出来，而后才是小分子从色谱柱中洗脱出来。

SEC是一种常用于生物聚合物的分离方法。目前的应用领域如下：

测定分子量，例如抗体（免疫球蛋白G，（见图1），肽和蛋白质）

作为一个研究构象变化的工具用于下游加工（后续加工和产品净化）。

特殊应用：用于肽和蛋白质混合物的自动化样品制备的SEC限制介入色谱柱。

图1 免疫球蛋白G（IgG抗体；图片由Sartorius提供）

几十年来，生物制药在医药市场上已经占据了重要地位。在这些生物制药产品中，有医药用酶、凝血因子、各种激素——如胰岛素、依泊汀或生长激素、单克隆抗体（mAbs）和生物工程疫苗。

SEC分析是下游加工中的标准方法，用于通过重组生产治疗性蛋白质和抗体来确定生物制造期间靶分子的纯度和聚集状态。

确定分子量间的差异来检测污染物和聚合物是基于高纯洗脱液的使用，高纯洗脱液不会与固相发生任何反应。……