孙雪娃，何超，方泽民，肖亚中



云芝NADPH-细胞色素P450还原酶在大肠杆菌中表达及酶学特性分析

孙雪娃1,2,3，何超1,2,3，方泽民1,2,3，肖亚中1,2,3

1 安徽大学 生命科学学院，安徽 合肥 230601 2 现代生物制造安徽省重点实验室，安徽 合肥 230601 3 安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心，安徽 合肥 230601

金城. 2018酶工程专刊序言. 生物工程学报, 2018, 34(7): 1021−1023.Jin C. Preface for special issue on enzyme engineering (2018). Chin J Biotech, 2018, 34(7): 1021−1023.

云芝具有很强的环境有机污染物降解能力，其烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-细胞色素P450还原酶 (NADPH-cytochrome P450 reductase，CPR) 为细胞色素P450酶 (Cytochrome P450s，CYPs) 提供电子，参与有机污染物的降解过程。序列分析显示，云芝基因组拥有1个潜在CPR序列和多个潜在CYP序列。为深入研究云芝CPR参与细胞降解有机污染物的分子机制，实验进行了云芝CPR在大肠杆菌中异源表达和酶学特性分析。结果表明，经IPTG诱导后，去除预测的N端膜锚定区域 (氨基酸残基1–24) 的CPR蛋白 (CPRΔ24) 可在重组菌中实现可溶性表达，且表达蛋白的分子量与理论值 (78 kDa) 一致。镍离子亲和层析和分子筛层析纯化后测得其比活性为5.82 U/mg。酶学性质分析显示，重组CPRΔ24的最适温度和pH分别为35 ℃和8.0，并对一些金属离子及有机溶剂具有不同程度的耐受性。酶在35 ℃、pH 8.0反应条件下对NADPH的动力学参数m和cat分别为19.7 μmol/L、3.31/s；对底物细胞色素c的动力学参数m和cat分别为25.9 μmol/L、10.2/s。以上研究为探究云芝CPR在环境有机污染物降解途径中的功能机制奠定基础。

云芝，NADPH-细胞色素P450还原酶，大肠杆菌，异源表达，酶学特性

白腐真菌能够降解许多难降解有机污染物，除了其胞外木质素降解酶系，其胞内的细胞色素P450酶系 (Cytochrome P450s，CYPs) 的降解功能也越来越引起人们的关注。……