曹 雷， 郑 灼， 李 宁， 赵 讯， 张颖轩

(哈励逊国际和平医院肾内科， 河北 衡水 053000)

急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)是一种常见的临床危重症，死亡率较高，往往表现为肾小管上皮细胞凋亡、坏死、异常增殖及纤维化等[1-3]。而在细胞增殖与凋亡失平衡的事件中必然伴随着细胞周期的改变，且研究证实细胞周期阻滞参与AKI的发生[4]。细胞周期水平的变化多取决于周期素(cyclins)、周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinases，CDKs)及周期素依赖性激酶抑制物(cyclin-dependent kinases inhibitors，CDKIs)的综合调控作用[5-6]。P21是一种CDKIs，隶属于CIP/KIP(cyclin inhibition protein/kinase inhibition protein)家族[7]。早前有研究显示，CIP/KIP家族的P18缺失可加重顺铂诱导的急性肾损伤[8]；在缺血再灌注所致肾损伤模型小鼠中可检测到P21的高表达，并与缺血预处理的保护效应密切相关[9]。但AKI发病机制复杂，且不同原因所致AKI的病理机制不尽相同，P21在顺铂(cisplatin)所致肾损伤中的作用尚不明确。

在上述实验背景下，本研究首先利用顺铂体外诱导肾小管上皮细胞HK-2损伤，并检测该过程中P21的表达情况，然后通过P21过表达进一步探讨P21对顺铂诱导的HK-2细胞损伤的影响及相关作用机制。

材 料 和 方 法

1 材料与试剂

胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、DMEM/F12培养基及Opti-MEM培养基购于Gibco；顺铂购于Sigma； LipofectamineTM2000购于Invitrogen；人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)购于中国科学院上海细胞库；CCK-8细胞活力分析试剂盒购于Dojindo；细胞凋亡检测试剂盒购于南京凯基公司；pcDNA3-P21、pcDNA3空载体及SYBR Green I real-time PCR 试剂盒由上海吉玛制药技术有限公司提供；其余试剂均为国产分析纯。

2 实验方法

2.1细胞培养、转染和分组 HK-2细胞置于含10% FBS的DMEM/F12培养基中，并在37 ℃、5% CO2的恒温培养箱中常规培养。每隔1～2 d更换培养基，每隔4～5 d胰酶常规消化传代。……