赵良渊， 侯晓敏, 秦小江

(山西医科大学 1体育教学部， 2基础医学院， 3公共卫生学院， 山西 太原 030001)

血管舒张功能减弱是高血压的发病原因之一[1]。在血管壁的结构中，主要调控血管舒缩活动的是血管中膜，而血管中膜主要由血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)组成。VSMCs收缩可减小血管直径，进而引起血压的升高，反之VSMCs舒张则可降低血压[2]。α1-肾上腺素能受体(α1-adrenergic receptor,α1-AR)主要包括α1A、α1B和α1D3种亚型[3]，其中α1A和α1D对血压的调节非常重要，且有研究表明α1D亚型参与VSMCs的收缩与舒张相关信号调控过程[4-5]，而胞内Ca2+浓度及钙调蛋白(calmodulin，CaM)水平与VSMCs的收缩活动密切相关[4-7]。本课题组此前对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats，SHR)和正常对照大鼠(Wistar-Kyoto RAT，WKY大鼠)的主动脉组织进行全基因表达谱检测，发现与WKY大鼠相比，SHR的Adra1d基因(α1D-AR的基因)表达量显著升高[8]。因此我们推测，Adra1d基因可通过调控Ca2+浓度及CaM的表达对VSMCs的舒缩活动进行调节。

针对Adra1d基因的mRNA编码区设计同源shRNA，把shRNA与载体质粒GV248结合为重组质粒并导入慢病毒内。慢病毒侵染大鼠主动脉VSMCs后，病毒携带的shRNA被导入大鼠主动脉VSMCs中并与之基因组相结合，从而导致Adra1d基因表达沉默，且shRNA可以在细胞中被稳定表达[9]，可保证3代以上细胞的转染效果。本实验针对Adra1d基因设计进行RNA干扰(RNA interference, RNAi)实验，建立shRNA慢病毒表达载体，探讨Adra1d基因与大鼠主动脉VSMCs内Ca2+浓度和CaM变化的关系。

材 料 和 方 法

1 主要材料与试剂

雄性SD大鼠，150～180 g，购自山西医科大学动物中心，许可证号为SCXK(晋)2009-0001。HEK293细胞(上海中科院细胞库)。

慢病毒载体GV248(吉凯基因化学技术有限公司)；Lipofectamine 2000(Thermo Scientific)；兔抗鼠 Adra1d多克隆抗体(Abcam)。

2 方法

2.1原代VSMCs的培养及鉴定 大鼠麻醉后，快速取其胸主动脉，采用组织块贴壁法培养VSMCs。……