刘丽敏， 钟华红， 邓宏伟， 肖红萍， 曾杞汶， 田 原， 刘小勇， 孟 晶△

(1暨南大学附属第一医院眼科， 广东 广州 510632； 2暨南大学附属深圳眼科医院， 广东 深圳 518040)

高度近视幼儿长期口服含越橘花青素(bilberry anthocyanins)的递法明片剂，其眼轴增长以及近视的进展可被延缓[1]。前期动物模型实验显示越橘花青素能够抑制豚鼠形觉剥夺性近视的眼轴增长，使巩膜组织中基质金属蛋白酶 2(matrix metalloproteinase 2，MMP2)表达减少及I型胶原蛋白(collagen type I,collagen I)表达增加[2]。本研究以人胚胎巩膜成纤维细胞(human fetal scleral fibroblasts，HFSF)为研究对象，探讨越橘花青素对HFSF近视相关蛋白MMP-2和collagen I表达的影响，为深入研究近视信号通路寻找突破点，并为近视的药物治疗寻找新的方法。

材 料 和 方 法

1 细胞

人胚胎巩膜成纤维细胞由中山大学眼科中心惠赠。

2 试剂

越橘花青素冻干粉(从欧洲越橘果实提取的混合物，花青素含量占其总重量的55%)由法国乐康美的澜制药厂惠赠；Western封闭液、蛋白彩色Marker、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、SDS-PAGE上样缓冲液(5×)和 BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)购于碧云天生物工程有限公司；Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-)和SYBR® Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus)购于TaKaRa；所用引物由上海生物股份有限公司合成，见表1。

表1 引物序列

F: forward; R: reverse.

3 方法

3.1HFSF的复苏、传代与培养 将HFSF复苏、常规培养，当细胞生长接近80%～90%融合时进行传代培育，倒置相差显微镜下察看细胞的密度及形态。

3.2MTT法检测越橘花青素对HFSF活力的影响 将越橘花青素依次配制为0、10-6、10-5、10-4、10-3、10-2、10-1和1 g/L各浓度组[3]，其中0 g/L为实验对照组，不含HFSF的培养液为空白对照组，分别培养6 h、8 h、12 h、24 h和48 h后噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]法检测HFSF增殖，每组浓度设3个平行复孔，实验共重复3次。……