李晴 周晓晴 陈沙 喻俊磊

摘要：建立了反相液相色谱法同时测定植物油中4种生育酚的方法。样品用甲醇超声提取，离心后取上清液氮吹至干，甲醇定容后过有机相滤膜，PEF柱（150 mm×3.0 mm，2.6 μm）分离，甲醇∶水（88∶12）作流动相等度洗脱，流速0.4 mL/min；柱温30 ℃；荧光检测（λex=294 nm，λem=328 nm）進样5 μL，外标法定量，在20 min内同时分离出α-、β-、γ-和δ- 4种生育酚异构体。4种生育酚的质量浓度在0.5～50.0 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系，线性相关系数大于0.999。在3个添加水平下的平均加标回收率在84.47%～116.50%，相对标准偏差≤6.0%（n=6），α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚及δ-生育酚的方法检出限分别为0.10、0.05、0.05、0.04 mg/kg，表明该方法灵敏度高，回收率好，可应用于实际样品的分析。

关键词：反相高效液相色谱；荧光检测；生育酚；米糠油

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2018）11-0087-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.11.021

Abstract： The method of simultaneous determination of 4 kinds of tocopherol in vegetable oil was established by reversed-phase liquid chromatography.After sample ultrasonic extraction with methanol，centrifugal supernatant liquid nitrogen blow to dry，the capacity after the methanol organic phase filter membrane，PEF column（150×3.0 mm，2.6microns） separation，methanol and water （88∶12） elution flow equal degree，velocity 0.4 mL/min；Column temperature 30 ℃；The fluorescence detection （a） of the sample volume was 5 μL，the external standard method was quantitatively determined，and the two types of paroxygenol isomers were isolated at the same time in 20 min. The mass concentration of 4 kinds of tocopherol was in a good linear relationship with the peak area within the range of 0.5～50.0 μg/mL，and the linear correlation coefficient was greater than 0.999. Adding in the three levels with respect to the average recovery was 84.47%～116.50%，relative standard deviation（RSD） for 6.0% or less（n=6），alpha tocopherol，beta tocopherol，gamma tocopherol and delta-tocopherol，method detection limit （LOD） were respectively 0.10，0.05，0.05，0.04 mg/kg. The method is accurate，sensitive and reliable，and can be applied to the analysis of actual samples.

Key words： inverse phase high performance liquid chromatography； fluorescence detection； tocopherol； rice bran oil

生育酚（Tocopherol）俗称维生素E，是人体代谢所必需的一种植物源性脂溶维生素，室温下为油状液体，橙黄或淡黄色，在热、酸等环境比较稳定，遇碱不稳定，易氧化。根据甲基的数目和位置的不同分为α-、β-、γ-和δ- 4种不同形式（结构式见图1）。4种生育酚的生物活性强度不同，如α-生育酚分布最广、生物活性最高，δ-生育酚抗氧化能力最强。生育酚对人体有重要的生理功能，具有抗氧化、抗衰老、抗不育、调节免疫力等作用，对生殖功能、细胞代谢均有影响[1]，对一些临床疾病有积极的预防作用。植物油中含有丰富的生育酚[2-5]，但不同植物油中生育酚的种类和含量有所不同。橄榄油、葵花子油、葡萄子油主要含有α-生育酚，核桃油、菜子油、亚麻子油、玉米油、大豆油中主要为γ-生育酚，另外大豆油中含有相对较高的δ-生育酚，米糠油含有最齐全的4种维生素E组分[6，7]。……