谭拥军 郭明月 向勤 李谕

摘 要：为了实现FOXP2基因在MCF-7细胞中稳定低表达，采用基因工程的方法构建pMAGic7.1-shFOXP2慢病毒干扰载体，并将其与辅助质粒共转染HEK293T细胞，包装shFOXP2干扰慢病毒，收取病毒上清加入到MCF-7细胞中，培养48 h，荧光定量PCR检测FOXP2的基因mRNA表达水平，Western Blotting检测FOXP2蛋白表达水平.获得了pMAGic7.1-shFOXP2干扰载体，从而成功建立FOXP2基因稳定干扰的MCF-7细胞株，为进一步研究FOXP2在乳腺癌发生发展中的功能提供了研究材料.

关键词：FOXP2；慢病毒载体；RNA干扰；乳腺癌MCF-7细胞

中图分类号：U44文献标志码：A

Abstract：In order to establish a MCF-7 cell line with lentivirus-mediated FOXP2 gene silencing and confirm its interference effect， the lentiviral vector （pMAGic7.1-shFOXP2） was constructed by genetic engineering and cotransfected with pVSVG、Δ8.91 into HEK293T cells， which generated the mature lentivirus， viral supernatant was collected and added to MCF-7 cells after 48 h， the mRNA and protein levels of FOXP2 were examined by qPCR and Western blot. Thus， we constructed and identified the lentiviral recombinant vector pMAGic7.1-FOXP2，successfully established a MCF-7 cell line with the interference of FOXP2 expression， as these findings imply a promising strategy for studying FOXP2 functions in breast cancer progression.

Key words：the forkhead box p2； lentivirus vector； RNA interference； breast cancer MCF-7 cells

FOXP2基因位于7号染色体短臂31区域，属于FOX转录家族.叉头框蛋白（forkhead box）家族是一类具有广泛功能的转录因子家族，它的DNA结合区是一个特殊的翼状结构，即螺旋转角螺旋蛋白结构，并且在生物进化中高度保守，此结构由100个氨基酸组成，包含3个α螺旋、3个β折叠以及2个大环结构[1].FOXP2蛋白包含一个谷氨酸富集区、一个FOX叉头框DNA结合区和一个由50个氨基酸组成的高度保守的N端，在N端能够形成锌指或亮氨酸拉链结构，这种结构是FOXP2与FOXP1 和 FOXP4 相互作用形成同源二聚化與异源二聚化所必需的 [2-3].FOXP2转录后可剪切形成18种转录本，经过生物信息学和蛋白结构分析，预测出FOXP2下游靶基因结合基序5-CAAATT-3[4].FOXP2主要在胚胎发育、细胞分化和肿瘤的上皮间质转化过程中发挥着重要的功能.

FOXP2（forkhead box p2）最早发现与控制语言能力发展相关，通过研究发现，FOXP2第553位的精氨酸突变为组氨酸（R553H）能够引发严峻的先天性语言障碍疾病，并且FOXP2 的缺失或者突变可能引发语言障碍及运动神经元……