上官醉飞 毛其芬⋆

肿瘤干细胞是肿瘤组织细胞群体中一群有干细胞特征的特殊肿瘤细胞，表达CD133、Bmi-1和Oct4等干细胞表面标志。文献报道相比常规肿瘤细胞，这群肿瘤干细胞对化疗的敏感性较低，因此这群有较强自我更新能力的肿瘤干细胞是造成化疗失败和肿瘤复发的重要因素［1-2］。顺铂是治疗肝癌的有效药物，然而肝癌干细胞对顺铂的高度抵抗性常造成化疗的失败［3］，本研究探讨雷公藤红素是否能提高顺铂对肝癌干细胞的杀伤活性。

1 材料与方法

1.1 材料 （1）试剂：顺铂、雷公藤红素、噻唑蓝［3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5- diphenyltetrazolium bromide，MTT］、凋亡检测试剂盒购于美国Sigma-Aldrich。DMEM培养基购于美国Gibco。蛋白提取液、PTEN、磷酸化PI3K、磷酸化AKT、活化caspase-3、Bad、Bcl-2、Bcl-xl和β-actin.兔抗人抗体购于美国Cell Signaling。CD133-FITC荧光抗体购于美国BD公司。PTEN siRNA（正向 ： GCACAAGAGGCCCUAGAUUTT，反向： AAUCUAGGGCCUCUUGUGCTT）购于上海吉玛生物。Lipofectamine 2000购于美国Invitrogen。ECL试剂盒购于美国Pierce。蛋白G免疫共沉淀琼脂糖珠购于美国Santa Cruz。（2）细胞培养：人肝癌细胞系Hep3B购于中科院上海细胞库。Hep3B肿瘤干细胞用流式细胞仪进行分选，CD133阳性的Hep3B细胞即为Hep3B肿瘤干细胞［4］。分选后的Hep3B肿瘤干细胞培养在含10%胎牛血清的DMEM培养基中，在37℃恒温培养箱中培养，通入5% CO2。Hep3B肿瘤干细胞传代1次/2～3d，传代时，用胰酶消化液使细胞进入悬浮状态并用DMEM培养基洗涤2次，将细胞悬液按1：3稀释后传代。

1.2 方法 （1）PTEN siRNA转染：使用Lipofectamine 2000按照试剂操作说明书步骤将50 pmol/ml PTEN siRNA转染入Hep3B肿瘤干细胞中，培养24h。（2）MTT法检测雷公藤红素和顺铂对Hep3B肿瘤干细胞细胞活力的影响 ：将Hep3B肿瘤干细胞按5×103/孔接种在96孔板上，分为对照组、顺铂组、雷公藤红素组、顺铂+雷公藤红素组及顺铂+雷公藤红素+PTEN siRNA组，分组培养方法见表1。……