强鑫华 周丽华 王萍 柳秋霞

副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）是我国沿海地区食源性暴发疾病中最常见的一种病原菌，近几年随着海鲜类食品在市场的广泛流通，VP所引发的食物中毒的发生率也逐渐增多。从我国食源性疾病监控网络数据显示，由VP引起的食物中毒呈显著上升趋势，成为我国首要食源性致病菌［1-2］。本文对125株VP季节分布及感染患者年龄特征、血清分型、毒力基因进行分析，为临床治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 2014年1月至2016年12月本院肠道门诊急性腹泻患者粪便分离的VP，共125株。

1.2 菌株分离鉴定 采集腹泻患者新鲜粪便或肛拭子按照浙江省CDC《2015年食源性疾病主动监测工作手册》的要求接种培养，对可疑分离菌株经全自动细菌鉴定仪Vitek-compact2鉴定到种。

1.3 菌株血清分型 使用副溶血性弧菌血清分型试剂盒进行菌体抗原（O）与荚膜抗原（K）凝集试验。K抗原分型：直接取新鲜的 3%NaCl营养琼脂培养物进行玻片凝集。O抗原分群：以0.85%生理盐水悬浮培养物制成约7个麦氏单位的均匀悬液，121℃高压1h后取裂解液进行玻片凝集。所用凝集血清均购自日本生研株式会社Denka Seiken公司，效期内使用。

1.4 毒力基因检测 采用热裂解法提取VP模板DNA，具体操作如下：将分离的副溶血菌株接种至5ml营养肉汤，37℃培养过夜，10000r/min离心5min，弃上清液；加入1ml生理盐水，震荡分散细菌，10000r/min离心5min，弃上清液；向沉淀中加100μl无菌蒸馏水，重新振荡悬浮后置100℃水浴10min；13000r/min离心10min，上清液即为PCR扩增所用的模板DNA，最后应用单重PCR检测trh、tdh两种毒力基因。

1.5 主要仪器 Vitek-compact2鉴定仪，生物梅里埃公司生产；……