董艳敏 刘满宇 张文慧 张林波

摘 要：为克隆人生长分化因子15基因，构建hGDF15基因的重组原核表达载体，为研究该基因的功能奠定实验基础，利用PCR技术克隆其基因序列，将其分别连接至pET28a和pColdI载体，构建重组pET28a-hGDF15和pColdI-hGDF15原核表达载体，并进行质粒PCR和双酶切验证以及测序验证。结果表明：重组载体构建成功，为进一步研究hGDF15蛋白的作用机制奠定基础。

关键词：人生长分化因子15；原核载体

中图分类号 Q78 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）11-0013-03

Abstract：For gene clone growth differentiation factor 15， constructing hGDF 15 gene recombinant prokaryotic expression vector， which laid the foundation for the study of the function of this gene， cloning the gene sequences using the PCR technology. Its connection to pET28a and pColdI carrier respectively， construct recombinant pET28a hGDF15 and pColdI hGDF15 prokaryotic expression vector， and verified plasmid PCR and double enzyme digestion and sequencing.The results show that the method of recombinant carrier is successful， which lays a foundation for further research on the mechanism of hGDF15 protein.

Key words：Human growth differentiation factor 15；Prokaryotic vector

糖尿病（Diabetes）是一类由遗传、环境、免疫等因素引起的严重威胁人类生命健康的慢性代谢障碍性疾病，其基本病理特征为胰岛素分泌绝对或相对不足，或外周组织对胰岛素敏感性的降低導致糖、脂肪、蛋白质、水及盐代谢紊乱的一种疾病[1-3]。近几年，全球糖尿病患病率逐年上升，预计到2030年，世界糖尿病患者人数将达到4.39亿[4-5]，但其病因和发病机制尚不完全明确。目前，糖尿病分为Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病、内分泌性糖尿病、药物或化学诱导的糖尿病、伴有其他遗传综合症的糖尿病和妊娠期糖尿病等[6-7]。其中Ⅰ型糖尿病是因为β细胞被破坏，致使胰岛素的绝对不足。而Ⅱ型糖尿病是由于胰岛素分泌相对不足产生的胰岛素抵抗，这种类型糖尿病占患者总数的90%以上，主要表现为体型较肥胖，有口干、口渴等症状[8-10]。

人生长分化因子15（human growth differentiation factor -15，hGDF15）是TGF-β超家族的成员之一，于1997年由Bootcov[11]等首次从人的骨髓单核细胞系统U937 cDNA文库中被分离出来。目前，有大量证据表明hGDF15与肥胖及Ⅱ型糖尿病的发生与发……