紫地榆活性成分对致龋菌生长和产酸影响的体外研究
2018-07-05王丽梅杨晓珍
王丽梅,杨晓珍,蓝 海*
(1.大理白族自治州人民医院口腔科,云南大理 671000;2.大理大学药学与化学学院,云南大理 671000)
龋病是在多因素影响下的牙齿硬组织发生的慢性疾病。其中致龋菌产酸可导致羟基磷灰石晶体溶解,无机钙、磷离子移出等,因此致龋菌产酸是釉质脱矿、发生龋损的主要原因。龋病表现为无机质的脱矿和有机质的分解,病变过程是一个脱矿与再矿化交替进行的过程〔1〕。紫地榆(Geranium strictipesR.Knuth)是牻牛儿苗科老鹳草属植物,其根入药,能消积食。有文献报道,紫地榆提取物能抑制牙釉质脱矿并能促进牙釉质再矿化〔2-8〕。紫地榆的乙酸乙酯提取物和水提物均能有效抑制口腔中变形链球菌和血链球菌的生长和产酸〔9-11〕。本文旨在研究紫地榆活性成分对常驻口腔细菌的生长及产酸的影响。
1 材料
变形链球菌(批号:ATCC25175)、粘性放线菌(批号:ATCC27044)菌种购于广东微生物菌种保藏中心;TPY液体培养基购于青岛海博生物技术有限公司;没食子酸,五倍子酸甲酯,儿茶素,鞣花酸,0.05%醋酸洗必泰(chlorhexidine acetate,CA),0.5、0.1 mol∕L氢氧化钠,葡萄糖,蔗糖,0.5 mol∕L磷酸盐缓冲液(PBS),无水乙醇,石油醚,乙酸乙酯,正丁醇,三氯甲烷,以上试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 实验溶液的制备 将紫地榆的4种活性成分溶于TPY液体培养基中,使其最终浓度为16.000 g∕L,使用时按2倍稀释法〔12〕稀释。
2.2 菌液的制备 将细菌复苏48 h后接种于TPY液体培养基中于厌氧条件下(37℃,80%N2、20%CO2)培养18 h进行增菌。经鉴定为纯培养后,离心,取菌体用无菌生理盐水洗涤3次。调整2种细菌的菌悬液浓度约5×107CFU∕mL。
2.3 2种致龋菌最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)的测定 配制含有紫地榆活性成分的液体培养基,按2倍稀释法调整活性成分的浓度在0.125 g∕L至16.000 g∕L。……
