钱 怡，杨 敏，林凡莉，汪姝玥，李晓明，黄纯兰

(西南医科大学附属医院血液内科，四川泸州 646000)

造血干细胞(hemopoietic stem cells，HSCs)存在于造血组织，具有高度的自我更新能力和多向分化潜能，是所有成熟血细胞的前体细胞。造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation，HSCT)是治疗恶性血液病、遗传性疾病及免疫缺陷病的重要手段之一。骨髓微环境对于HSCs的增殖、分化、迁移及归巢等具有重要的调控作用[1]。HSCT并非仅仅是单纯的HSCs输注，还包括骨髓基质细胞和其他造血调节因子的同时输注，以便更好、更快地重塑造血系统和免疫系统。然而，人骨髓中HSCs比例较低，极大地限制了HSCT的发展和临床应用。本文通过研究微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells，MECs)对HSCs增殖的影响，建立一种促进HSCs增殖的方法。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 体质量20～25 g，4～6周龄，雄性或雌性，无特殊病原体(SPF)级C57BL/6小鼠(购自成都达硕生物科技有限公司)和C57系GFP小鼠(购自重庆腾鑫生物公司)。

1.1.2主要仪器与试剂 CO2培养箱(Thermo Forma公司)，超净工作台(Air Tech公司)，台式离心机(Bioridge公司)，倒置荧光显微镜及照相系统(Olympus公司)，流式细胞仪(BD公司)，质谱(MS)分离柱、mini MACS磁珠分选装置、CD117细胞分选试剂盒、小鼠白细胞介素(IL)-3、小鼠干细胞因子(SCF)、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗鼠CD31(CD31-FITC)及藻蓝蛋白(APC)标记的CD117(CD117-APC)购自Miltenyi Biotec公司，血管内皮生长因子(VEGF)购自ACRO公司，Ⅰ型胶原酶、明胶粉购自Sigma公司，藻红蛋白标记的兔抗鼠CD34(CD34-PE)及多甲藻黄素叶绿素蛋白(PerCP)标记的CD45(CD45-PerCP)购自BD公司，羊抗八因子相关抗原(vWF)多克隆抗体、FITC标记的驴抗羊IgG(IgG-FITC)购自Abcam公司，Ficoll分离液购自TBD公司，DMEM-F12购自南京三生生物公司。

1.2方法

1.2.1MECs分离……