孙淑琴 孙冰冰 杨秀荣 张惟 霍建飞

摘要：解淀粉芽孢杆菌Bs-18是一株对黄瓜白粉病具有显著防效的生防菌株，為深入研究此菌株的生防作用机理，本研究应用电击法构建了携带转座子TnYLB-1的穿梭质粒pMarA转化Bs-18的突变体文库。通过对转座温度和转座时间的筛选，筛选出50℃高温诱导16 h可获得最大转座成功率，并对突变体进行了PCR验证。Bs-18突变体文库的构建为研究其生防功能基因并深入揭示其生防作用机制奠定了基础。

关键词：突变体文库；转座子；生防功能基因

中图分类号：S476.1+Q785文献标识号：A文章编号：1001-4942（2018）04-0012-04

Abstract Bacillus amyloliquefaciens Bs-18 is a biocontrol strains against cucumber powdery mildew with significant control effect. In this paper， the mutant library of Bs-18 was constructed with the shuttle plasmid pMarA carrying transposon TnYLB-1 by the electric shock method to deeply study the molecular mechanism of the biocontrol strain. Through screening transpositional temperature and time， the maximum transpositional success rate was obtained after induced at 50℃ for 16 hours. The mutants were verified by PCR. The construction of Bs-18 mutant library laid a foundation for further study on its biocontrol function genes and mechanism.

Keywords Mutant library； Transposon； Biocontrol function genes

随着许多微生物基因组全序列的获得，人们对微生物关注和研究的热点逐渐从结构基因组学转移到功能基因组学上。转座子随机突变技术因操作简单逐渐成为研究功能基因组（如发现新基因、克隆功能基因、发掘已知基因的新功能）的一种有效工具。目前利用转座子随机突变技术对于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的研究较为深入，并且获得了与芽孢形成、生物被膜形成以及植物与微生物互作等相关基因[1，2]。随着对转座子技术研究的深入，解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）在这一领域的工作也逐渐展开。郝建安等[3]通过对解淀粉芽孢杆菌Mu转座突变子进行表型筛选，并结合克隆和测序发现了2个新的抑菌作用调节基因rpmGA和yxlC。高卫华等[4]对1株野生型解淀粉芽孢杆菌进行了mini-Tn10 转座突变库的构建，根据菌落形态差异进行初筛，利用结晶紫染色法筛选生物被膜缺陷菌株，由此发现了芽孢杆菌生物被膜形成相关基因。……