（1重庆医科大学附属第二医院检验科 重庆 400000）（2第三军医大学大坪医院病理科 重庆 400042）

EGFR基因位于第七号染色体短臂上（7p12），长约118 kb，由28个外显子组成。其编码的蛋白具有酪氨酸激酶（tyrosine kinase,TK）活性，是NSCLC最常见的驱动基因，据统计，中国NSCLC患者中EGFR突变率约为35%～40%[1]。EGFR诱导癌症至少通过3种机制：EGFR配体的过表达、EGFR的扩增或EGFR的突变活化，其中以EGFR 的突变活化为主要机制。已经检测到的突变数量最多的是非小细胞肺癌[2-3]。测序法是传统广泛应用的方法，在检测EGFR突变中使用较多，但由于其灵敏度有限、检测过程时间长，对技术设备条件要求严格等，在临床应用受到一定限制。而ARMS法由于其灵敏度较高、耗时少、易操作等特点，在各种标本类型中甚至在外周血循环肿瘤细胞DNA中检测EGFR突变也有一定的意义。因此本文通过ARMS法和直接测序法两种检测的对比，来选择更加敏感，准确的EGFR基因检测方法。

1.资料与方法

1.1 标本来源

对2012年7月—2013年11月在第三军医大学附属大坪医院病理科接受EGFR突变检测的NSCLC病人标本进行研究，其中非小细胞肺癌的患者127例，其中：男性76例、女性51例、年龄26～83岁，平均年龄54.5岁。

1.2 仪器与试剂

ARMS试剂盒内含内参基因特异性引物，探针，EGFR基因突变型，内控基因特异性引物，dNTP的溶液，TaqDNA聚合酶，阳性质控品，PCR管，荧光PCR管。

1.3 检测步骤

待测样本进行DNA提取后，使用微量紫外分光光度计(NanoDrop1000)测定DNA浓度及纯度，取10ulDNA样本稀释至100ng∕ul待用。将纯化后的DNA用荧光PCR方法进行检测，得到突变基因的反应曲线。测序法则上测序仪进行检测，结果与EGFR序列进行比对。……