符传山，钟振华，杨毅生

(1.海南华拓天涯制药有限公司质量部，海南 海口 571159； 2.江西省药品检验检测研究院/江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029)

棓丙酯(propyl gallate，PG)，为抗脑血栓药，其化学名为3,4,5-三羟基苯甲酸丙酯，分子式为C10H12O5，为处方药，非国家基本药物目录品种[1-4]。棓丙酯是由中国中医科学院西苑医院研发成功的抗脑血栓药，1985年由吉林省红光制药厂首先生产，1987年闽东制药厂引进该品种，获得批准文号。棓丙酯的各类制剂主要用于预防和治疗脑血栓、冠心病及血栓性深静脉炎等。全国共6家生产企业获得棓丙酯原料药的批准文号，目前在生产的仅有2家。根据上述2家企业提供的资料，棓丙酯原料药主要制备工艺流程为：以没食子酸、正丙醇为起始物料，在对甲苯磺酸(A企业)或浓硫酸(B企业)的催化作用下发生酯化反应生成没食子酸丙酯(见图1)，再经过蒸馏浓缩、溶解(纯化水)、结晶及过滤得粗品，粗品经溶解(纯化水)、活性炭脱色、过滤、结晶、过滤及干燥得成品。该药在合成过程中使用的溶剂只有正丙醇，同时棓丙酯原料药在贮藏过程中发生降解也会产生正丙醇。《中华人民共和国药典》残留溶剂检查法中规定正丙醇的限度为0.5%[5]。故本研究拟采用顶空气相色谱法建立棓丙酯原料药中正丙醇残留量的测定方法，以期为该药的质量控制提供参考[6-10]。

1 材料

1.1 仪器

Clarus 680HS40气相色谱，氢火焰离子化检测器(flame ionization detector，FID)，购自珀金埃尔默企业管理上海有限公司；BP211D精密电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)。

1.2 药品及试剂

N,N-二甲基甲酰胺(色谱纯，纯度为99.9%)，四氢呋喃(色谱纯，纯度为99.9%)，正丙醇(色谱纯)；棓丙酯(A企业，批号：G6130020、G6150010和G6140030；B企业，批号：C002-140802、C002-140801M和C002-140802M)。

图1 棓丙酯的合成路线Fig 1 Synthetic route of propyl gallate

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 内标溶液：精密称取四氢呋喃100.56 mg，置于100 ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 对照品溶液：精密称取正丙醇0.305 0 g，置于50 ml容量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液(正丙醇质量浓度为6.100 0 mg/ml)。分别精密量取对照品储备溶液0.05、0.25、0.5、1.0、2.0及2.5 ml置于10 ml容量瓶中，分别精密加入内标溶液2 ml，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，得到0.030 5、0.152 5、0.305 0、0.610 0、1.220 0及1.525 0 mg/ml的系列质量浓度对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液：精密称取样品1 g，置于10 ml容量瓶中，精密加入内标溶液2 ml，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 色谱条件

色谱柱为DB-624石英毛细管柱(30 m×0.53 mm，3.0 μm)；柱温50 ℃保持6 min，以10 ℃/min升温至200 ℃保持2 min；进样口温度为250 ℃；FID检测器；FID温度为300 ℃。载气为氮气(N2)；恒流流速5 ml/min；H2：30 ml/min；Air：300 ml/min；分流比4∶1。顶空进样，平衡时间：25 min；顶空瓶温度：95 ℃。根据上述色谱条件，分别精密量取空白溶剂N,N-二甲基甲酰胺、对照品溶液及供试品溶液各5 ml，分别置于20 ml顶空瓶中，密塞，顶空进样，记录色谱图[11-14]。结果表明，空白溶剂对测定无干扰，内标峰与对照品峰分离度良好；峰对称性良好，见图2。

A. 空白溶剂；B.对照品溶液；C.供试品溶液A. blank solvent; B. reference solution; C. test solution

2.3 线性关系考察

分别精密量取系列对照品溶液5 ml，置于20 ml顶空瓶中，顶空进样，记录色谱图。以对照品溶液浓度为横坐标(X)，正丙醇峰面积(A)与内标峰面积之比为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。回归方程为Y=0.857 9X+0.004 1，R2=0.999 8。结果表明，正丙醇在质量浓度0.030 5～1.525 0 mg/ml范围内呈良好的线性关系，见图3。

2.4 精密度试验

精密量取对照品储备溶液5.0 ml置于50 ml容量瓶中，分别精密加入内标溶液10 ml，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0.610 0 mg/ml的对照品溶液。精密量取5 ml，置于20 ml顶空瓶中，密封，平行制备6份，顶空进样，记录色谱图。正丙醇峰面积与内标峰面积之比为0.520 1、0.528 7、0.523 6、0.527 9、0.522 1及0.526 8，RSD=0.66%，符合《中华人民共和国药典》(2015年版)“通则”的要求。

图3 线性回归方程Fig 3 Regression equations

2.5 重复性试验

取样品(批号：G6130020)适量，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，平行6份，按“2.2”项下色谱条件进样测定。结果表明，6份样品平均含量为0.042%，RSD=0.9%。

2.6 加样回收率试验

取样品(批号：G6130020)1 g(正丙醇含量为0.042%)，共9份，精密称定，置于10 ml容量瓶中，分别精密加入0.5、1.0及2.0 ml对照品储备溶液(正丙醇质量浓度为6.100 0 mg/ml)，每个回收浓度点各3份，按“2.1.3”项下方法制备，再按“2.2”项下色谱条件进样测定。加样回收率(%)=(测得量-样品含有量)/加入量×100%，试验结果见表1。

表1 加样回收率试验结果Tab 1 Results of recovery test

2.7 定量限与检出限试验

精密量取对照品储备溶液(正丙醇质量浓度为6.100 0 mg/ml)1 ml，置于100 ml容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取2 ml，置于10 ml容量瓶中，精密加入内标溶液2 ml，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置于20 ml顶空瓶中，顶空进样，记录色谱图。结果表明，定量限浓度为12.2 μg/ml，信噪比=10.3。精密量取对照品储备溶液(正丙醇质量浓度为6.100 0 mg/ml)1 ml，置于100 ml容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置于10 ml容量瓶中，精密加入内标溶液2 ml，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置于20 ml顶空瓶中，顶空进样，记录色谱图。结果表明，定量限质量浓度为6.1 μg/ml，信噪比为4.1。

2.8 含量测定结果

精密称定样品1 g，按“2.1.3”项下方法制备，顶空进样，记录色谱图。结果显示，6批棓丙酯样品均检出正丙醇，见表2。

表2 正丙醇含量测定结果Tab 2 Determination results of propyl alcohol

3 讨论

正丙醇在《中华人民共和国药典》中被归为第三类溶剂，其限度为不得超过0.5%。从样品测定结果可以看出，2个生产企业6批棓丙酯样品中正丙醇残留量均在限度范围内。A企业3批样品(2013—2015年)及B企业3批样品(同一年份生产)中正丙醇含量测定结果均较低，说明这2家企业棓丙酯生产工艺及样品在贮藏过程均较为稳定。棓丙酯中的正丙醇不仅在生产过程中可能有残留，而且在贮藏过程中可能发生降解生成正丙醇。故监测棓丙酯中正丙醇的含量，有助于棓丙酯从生产到贮藏运输各环节的质量控制。

本方法检测棓丙酯中正丙醇残留量的专属性强，准确度高，检出限较低(6.1 μg/ml)，是科学、灵敏并准确的测定法。

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