张雪 陈亮亮 戴红霞 张文胜 任文燕

（苏州大学医学部剑桥-苏大基因组资源中心，苏州 215000）

胚胎干细胞（Embryonic stem cell，ESC）是在胚胎发育早期动物囊胚中存在的一群尚未分化的原始细胞［1］，具有发育上的全能性，并能在体外无限增殖。胚胎干细胞的干性维持和谱系分化受到多层次、网络化的调控，包括关键转录因子［2］、信号通路［3-4］和表观遗传学修饰［5］等。有报道指出，miRNA这类小分子RNA在胚胎发育、干细胞分化、细胞凋亡及肿瘤发生发展等多种生物学进程中都起着重要的作用［6］。miR-22是由22个核苷酸组成的非编码RNA，其在多种物种中序列高度保守。据报道，miR-22在不同类型的细胞中具有不同的生物学功能，在肿瘤细胞中，miR-22作为肿瘤抑制因子［7-9］，抑制细胞增殖、迁移［10］；在心肌细胞中，miR-22高表达促进自噬、抑制细胞凋亡，从而保护心肌细胞免受饥饿损伤［11］；miR-22通过抑制BMP7促进肝硬化的发展［12］；在小鼠胚胎干细胞中，miR-22抑制MECP2表达，从而促进胚胎干细胞向平滑肌方向分化［13］。然而，miR-22对小鼠胚胎干细胞干性维持、自我更新和谱系分化的系统研究相对较少，有待进一步深入探索。

CRISPR/Cas9技术源于嗜热型古细菌为抵御外源DNA、病毒入侵所进化出的免疫系统中的规律成簇的间隔短回文重复序列［14-15］，这种短回文重复序列与许多外源病毒或DNA的序列互补。CRISPR/Cas9系统中，sgRNA通过自身NGG前20个碱基与基因组中的靶位点碱基互补配对结合，将Cas9蛋白导向靶位点，发挥其核酸内切酶作用，将DNA双链切断［16］。断裂的双链DNA可以进行两种修复，非同源性末端接合（Non-homologous end joining，NHEJ）和同源介导修复（Homology Directed Repair，HDR）。……