王跃强 Avinash Bhandoola

（1. Laboratory of Genome Integrity，Center for Cancer Research，National Cancer Institute，Bethesda，MD 20892-4254，USA ；2. 深圳国家基因库合成与编辑平台，深圳 518083）

小鼠免疫系统涉及种类众多、功能特性各异的多种类型细胞，揭示这些免疫细胞分化发育的机制是免疫学研究的核心工作之一。在小鼠中，造血干细胞（Hematopoietic stem cells，HSC）是其他血细胞的始祖，HSC通过分化发育可以建立整个血细胞系统（图1-A）［1-2］。近年来单细胞转录组测序和CRISPR/Cas基因编辑技术快速发展，为免疫学研究提供了新方法。如能对分离的小鼠造血干细胞实施基因编辑，再通过体内移植或体外诱导促使其分化发育；通过细胞表面抗原分析或单细胞转录组分析，能快捷地研究各类免疫细胞分化发育的分子机制。为此，需要建立针对造血干细胞和其他分化度较低的前体免疫细胞的基因编辑技术方法。

目前，针对人类CD34+造血干细胞（CD34+Hematopoietic stem/progenitor cell，CD34+HSPC） 实施基因编辑的报道已有多项，但针对小鼠造血干细胞实施基因编辑的研究鲜有报道。人类对CD34+HSPC的研究通常采用磁珠法，即从脐带血或外周血中分离造血干细胞，使用电转或病毒载体（如慢病毒载体或腺相关病毒载体）实施遗传转化，通过基因编辑实现基因治疗等多种目的［3-10］。在小鼠造血干细胞中实施基因编辑仅有少量报道。2014年，Heckl等［11］从小鼠骨髓中分离LSK细胞，并使用慢病毒载体实施基因编辑敲除了Smc3、Ezh2等基因；随后将LSK细胞移植到受体小鼠体内，在长期培养后构建了小鼠急性髓系白血病模型。2016年，Gundry等［4］从小鼠骨髓中分离到Kit+骨髓细胞，并通过电转实施了基因编辑。此外，有多项报道介绍了针对树突状细胞、B细胞、T细胞及巨噬细胞等分化度高的免疫细胞实施基因编辑的研究成果［12-13］。……