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来源于Bacillus circulans的重组β-CGT酶的分离纯化及其生化性质分析

2018-06-05李才明顾正彪李兆丰

食品与生物技术学报 2018年4期
关键词:质量

李才明 , 黄 敏 , 顾正彪 , 洪 雁 , 程 力 , 李兆丰 *

(1.江南大学 食品学院,江苏 无锡 214122;2.食品科学与技术国家重点实验室,江南大学,江苏 无锡 214122;3.江南大学 食品安全与质量控制协同创新中心,江苏 无锡214122)

环糊精(Cyclodextrin),又称 Schardinger糊精、环聚葡萄糖等,是由6个及以上D-吡喃葡萄糖通过α-1,4糖苷键连接而成的环状低聚物[1-3]。最常用的环糊精主要有3种,为α-、β-和γ-环糊精,分别由6、7和8个葡萄糖残基分子构成,这3种环糊精又统称为基础环糊精[4]。环糊精的空间结构呈中空圆筒形[5],其外部含有葡萄糖单元C-2、C-3以及C-6的羟基,导致外部亲水;而其内腔含有醚键氧原子以及C-3和C-5上的氢原子,所以内腔疏水[6]。正因为这种特性,使得环糊精在食品、农业、生物、医药、化工等领域具有广泛的用途[7-9]。

环糊精的工业化生产均采用酶法工艺,即在环糊精葡萄糖基转移酶(EC2.4.1.19,Cyclodextrin glucanotransferase或Cyclodextringlycosyltransferase,简称CGT酶)的催化作用下通过环化反应转化淀粉或相关基质而生成环糊精[10-12]。根据CGT酶催化反应初始阶段所产生主要环糊精的种类,可将CGT酶分为3种类型,即α-CGT酶、β-CGT酶、γ-CGT酶[13]。

在前期研究中,来源于Bacillus circulans STB01的β-CGT酶成功在枯草芽孢杆菌B.subtilis WB600中实现了胞外过量表达,为其工业化生产及应用打下了基础。为了促进重组β-CGT酶在工业上的应用,有必要全面分析其生化性质。虽然来源于B.circulans的β-CGT酶的一些生化性质已有报道[14-17],但关于其不同pH下的热稳定性、酶浓度对其热稳定性的影响尚未见报道,而且有关金属离子对β-CGT酶环化活力影响的报道也不是很全面,尤为明显的是,大部分针对生化性质的研究主要是围绕CGT酶的水解活力进行开展,而非以其特征反应的环化活力为指标进行评价。……

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