赖 昕，林珠灿，余丽双，黄雪雪，陈 莉

（福建中医药大学药学院，福建，福州 350122）

原发性肝癌(primary carcinoma of the liver, PLC,以下简称肝癌) 是临床上最常见的恶性肿瘤之一。PLC在我国高发，目前我国发病人数约占全球的55%[1]。以美洲大蠊提取物为原料的消癥益肝片，临床上用于治疗原发性肝癌疗效显著，使用后可使病人肝大回缩显著，肝区痛感减轻、食欲增加、乏力好转、腹胀减轻，甲胎蛋白下降，带瘤患者生存期延长[2]，但该药的抗肿瘤药效物质基础尚未阐明。研究发现，美洲大蠊中的化学成分主要有氨基酸、蛋白质、多肽、脂肪酸、信息素、壳聚糖等[3]。

国内外对美洲大蠊抗肿瘤活性成分的研究多为粗分离产物或肽类物质的作用[4-6]，对小分子活性物质研究较少。本课题采用 MTT法追踪抗肿瘤活性，并利用Sephadex LH20和反相高效液相色谱对消癥益肝片中的小分子活性物质进行研究，旨在为该药的进一步应用及质量控制提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

实验所用消癥益肝片浸膏干燥粉末由福州海王金象中药制药有限公司提供。

1.2 试剂与仪器

DMEM 培养基（Invitrogen公司）；胎牛血清（PAN-Biotech公司）；Penicillin-Streptomycin双抗；胰酶（GIBCO公司）； MTT（Sigma公司）；DMSO（AR,国药集团）。

Sephadex LH20葡聚糖凝胶（GE公司）；反相液相色谱柱Chromatorex C18柱（250 mm × 20 mm，10 μm），TPQ05-2546WT（250 mm ×4.6 mm）（北京慧德易科技有限责任公司）；Bruker AVANCE III 500氢核磁共振（Bruker公司）。

1.3 方法

1.3.1 提取和纯化

30 g消癥益肝片浸膏经70 %乙醇超声浸提2次，离心过滤的上清经浓缩后，以0.22 μm滤膜过滤，上样于Sephadex LH20葡聚糖凝胶柱。用70 %甲醇以1 mL/min的流速进行洗脱，并记录280 nm下的色谱曲线。根据记录的色谱曲线合并洗脱液，旋转蒸发仪浓缩蒸干溶剂，得到1-1、1-2、1-3、1-4四个粗提物组分。……