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HPLC法测定蒙成药波仁-12(保肾散)中盐酸小檗碱的含量

2018-06-01包长龙

中国民族医药杂志 2018年1期
关键词:小檗盐酸供试

包长龙

(内蒙古通辽市食品药品检验所,内蒙古 通辽 028000)

波仁-12(保肾散)的处方由鹿茸、紫河车、杜仲、龟甲(制)、关黄柏、麦冬、冬虫夏草、巴戟天、锁阳、党参、千年健、续断等12味单药组成的散剂。主要用于各种肾病及早期尿毒症[1]。本试验对波仁-12(保肾散)中关黄柏药材中所含的药用成分盐酸小檗碱利用HPLC法进行含量测定,结果,测定准确,方法可行,可作为波仁-12(保肾散)的质量控制方法。

1 仪器和试剂

1.1 仪器:岛津LC-10AT型高效液相色谱仪(日本产),SPD-VP紫外检测器,CLASS-VP色谱工作站,TP-300超声波清洗机,色谱柱:shim-pack VP-ODS C18柱(250×4.6mm,粒度5μm)。

1.2 试剂与试药: 甲醇、乙腈(色谱纯,天津天大化学试剂厂);水为试验用高纯水。其它试剂均为分析纯。盐酸小檗碱对照品(编号:110713-201212,供含量测定用,纯度98.1%计):由中国食品药品检定研究院提供;供试品由内蒙古通辽市科左中旗蒙医院提供。批号为: 20081106、20090205、20090508。

2 方法学考察

2.1 色谱条件: 流动相:乙腈-0.05%磷酸二氢钾溶液(氢氧化钠试液调节PH值至5.0)(30:70)为流动相;流速1.0mL/min;柱温25℃;检测波长为346nm;进样量:10μL[2]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备: 精密称取盐酸小檗碱对照品13.12mg(实际为13.12mg×98.1%=12.87mg),置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5mL,置25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每1mL含盐酸小檗碱25.74μg)。

2.2.2 供试品溶液的制备: 精密称取本品约2g,置具塞锥形瓶中,精密加入盐酸-甲醇(1:100)溶液25mL,称重,密塞,加热回流30分钟,放冷,再称重,用盐酸-甲醇(1:100)溶液补足减失的重量,摇匀,以0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察 : 精密量取上述对照品溶液各1、3、5、7、9、10mL,分别置25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。各精密吸取10μl进样,按上述色谱条件测定,记录谱图及峰面积值,以进样量(W:μg)为纵坐标,以峰面积值(A)为横坐标,绘制标准曲线,结果盐酸小檗碱在0.05148~0.5148μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为:Y=4.2E+6X-8620.7,r=1.0000。

2.4 精密度试验 : 精密量取盐酸小檗碱对照品溶液(25.74μg /mL)10μL,连续进5次,测定对照品溶液峰面积,结果峰面积平均值为1065205,RSD为0.72%。

2.5 稳定性试验: 精密量取同一批供试品溶液10μl,每间隔0、4、8、14h注入色谱仪中,测定记录峰面积值,结果平均峰面积值为1061875,RSD为2.0%,表明供试品溶液在1h内稳定性良好。

2.6 重现性实验: 取同一批号为20081106供试品溶液6份,研细,精密称取约2g,按上述色谱条件测定每份样品含量。按外标法计算含量。结果平均含量(mg/g)为0.312,RSD为1.4%,表明本试验重现性良好。

2.7 加样回收率试验: 加样回收试验:精密称取含量为0.32mg/g的供试品6份,各约1.0g,精密加入用甲醇配制的浓度为0.1287mg/mL的盐酸小檗碱对照品溶液3mL,再精密加入甲醇22mL,分别按含量测定项下的方法测定每份供试品含量,计算回收率,结果见表1。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果

3 样品含量测定

样品含量测定 取3批供试品(批号为20081106、20090205、20090508)按供试品2.2.2 项下的方法处理并测定,3批样品的测定,结果见表2。该条件下盐酸小檗碱的保留时间为15.8min。

表2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果

4 阴性对照试验

取按处方量并以相同工艺制备的阴性样品(关黄柏药材为阴性),操作同样品分析项下方法,测得结果为:阴性对照品色谱图中在与盐酸小檗碱对照品色谱相对应的保留时间处无色谱峰出现,表明其它组分对波仁-12中盐酸小檗碱的测定无干扰,对照品样品和阴性样品色谱峰见图1、2、3。

5 讨论

5.1 检测波长的选择:用紫外分光光度仪测定盐酸小檗碱的吸收光谱,其最大吸收波长在346nm处,与文献值一致[3,4],故确定测定波长为346nm。

5.2 系统适用性试验: 理论塔板数:N≥2000;拖尾因子:1.48。检测过程中系统比较稳定。

5.3 样品测定试验: 样品测定试验中RSD≤2.0。波仁-12中盐酸小檗碱的含量较低,影响检测的灵敏度,使得RSD值为偏高。

5.4 本操作法简便、灵敏、准确、专属性强,故认为可作控制波仁-12(保肾散)的检测方法。

[1]内蒙古食品药品监督管理局.内蒙古蒙药制剂规范(第一册)[M].呼和浩特:人民出版社2007:168.

[2]国家药典委员会.中国药典一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010.

[3]黄海卫.川黄柏中盐酸小檗碱的含量测定研究[J].湖南中医药导报,2003,9(4):86-87.

[4]冯果.香连丸中盐酸小檗碱的含量测定[J].贵阳中医学院学报.2011,33(4):7-9.

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