陈 桦，李 静，赵春华

(中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 组织工程中心, 北京 100005)

美国癌协会2017年发表的最新癌统计数据显示：在女性中最常见的癌中，乳腺癌发病率已居女性恶性肿瘤首位[1]。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是肿瘤微环境的重要组成部分。微环境中的炎性因子可以诱导循环的MSCs和在相邻组织中的MSCs归巢到肿瘤中，在微环境中多种因子的刺激下以肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts，CAFs)的形式参与了微环境中细胞基质的组成[2]。

本实验室前期初步研究发现利用乳腺癌细胞系MCF- 7与MSCs共培养为模型来模拟肿瘤微环境， MSCs可以通过分泌TGF-β等因子诱导MCF- 7细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transi-tion，EMT)，提高肿瘤细胞的侵袭和转移能力[3]。本实验旨在进一步探讨肿瘤细胞对MSCs向CAFs转化的影响及发挥调控作用的关键分子。通过表达谱芯片分析MCF- 7细胞与MSCs共培养后不同时间点的基因表达谱，共培养后MCF- 7中miR- 210的表达持续上升。miR- 210是细胞缺氧后反应变化最为灵敏的miRNAs 之一，也有文献报道称miR- 210的上调与肿瘤的产生有密切联系[4]。因此，本研究提出假设：乳腺癌细胞通过上调miR- 210的表达，调节肿瘤微环境中MSCs向CAFs转化，以促进肿瘤的生长。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂：DMEM、 D/F- 12、RPMI 1640和胎牛血清(Gibco公司)；青霉素和链霉素(PS)(华北制药股份有限公司)；胶原酶P(Roche公司)；细胞转染试剂Lipofectamine 2000TM(Invitrogen 公司)；miR- 210 的模拟物和抑制剂、CAFs相关特征标志物引物(上海生工生物工程有限公司)；反转录试剂盒(TaKaRa公司)；山羊抗兔、山羊抗鼠IgG(碧云天生物有限公司)；多聚甲醛(国药集团化学试剂有限公司)。……