张达容，王维莲，吴立翔，柳满然

(1.重庆大学附属肿瘤医院 重庆市肿瘤研究所 重庆市肿瘤医院 检验科，重庆 400030；2.武警重庆市总队医院检验科，重庆 400061； 3.重庆医科大学 检验医学院 临床检验诊断学教育部重点实验室， 重庆 400016)

乳腺癌是女性中最多见的恶性肿瘤。根据2017年最新的统计数据，乳腺癌在美国女性全部新发癌症所占比例为30%，而因乳腺癌死亡患者占全部因癌死亡患者的14%，为第二死亡病因，仅次于肺癌[1]。其中乳腺癌患者治疗后复发转移是其死亡的主要原因[2]。侵袭和转移是恶性肿瘤的本质特征，也是肿瘤治疗学所面临的最具挑战的问题，因此，进一步阐明肿瘤侵袭和转移的分子机制是制定新的治疗方案的理论基础。近年来研究发现，Twist基因可诱导细胞发生上皮间质转换(epithelial to mesenchymal transition, EMT),促进肿瘤细胞的迁移和侵袭[3- 4]，但其在乳腺癌中的具体作用尚有待进一步研究。本研究首先通过慢病毒技术，靶向沉默人三阴性乳腺癌细胞Hs578TTwist基因的表达，然后进一步研究Twist基因沉默对人三阴性乳腺癌细胞Hs578T迁移和侵袭能力的影响，并初步探讨其潜在的机制，这为深入研究Twist基因在三阴性乳腺癌细胞中的具体作用提供了一定基础和思路。

1 材料与方法

1.1 材料

人三阴性乳腺癌细胞Hs578T(由本实验室保存)。RPMI1640培养基和胎牛血清(Gibco公司)；Trizol和PCR引物(Invitrogen公司)；反转录试剂盒和PCR试剂(TaKaRa公司)； RIPA蛋白裂解液和BCA蛋白定量检测试剂盒(碧云天生物技术研究所)；鼠抗人Twist蛋白单克隆抗体(Abcam公司)；兔抗人p-AKT、AKT、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白单克隆抗体(Cell Signaling Technology公司)；……