宁芳 陈光

胚胎干细胞是来源于着床前囊胚期的内细胞团或早期胚胎原始生殖嵴的原始生殖细胞的一种多潜能细胞，具有体外无限增生和高度自我更新的能力，在一定条件下，能分化成3个胚层来源的各种细胞[1，2]。因此，胚胎干细胞在动物和人的胚胎发育、致畸实验、组织工程和移植治疗等研究领域具有重要的科学意义和巨大的应用前景[3]。现已经证明小鼠胚胎干细胞可以分化为心肌细胞、造血细胞、卵黄囊细胞、骨髓细胞、平滑肌细胞、脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、内皮细胞等[4]。然而胚胎干细胞能否向牙源性上皮方向转化在国内还未见报道。在本实验中，我们对小鼠的胚胎干细胞R1系及CGR8系进行了原代培养及传代，并进行了体内外的鉴定，为下一步探讨胚胎干细胞替代牙源性上皮细胞的研究奠定基础。

资料和方法

1.细胞来源：胚胎干细胞R1系及CGR8系源自中国科学院广州生物医药与健康研究院。

2.实验动物：6周龄免疫缺陷小鼠（第四军医大学实验动物中心）。

3.主要试剂：高糖DMEM/F12 培养基（Gibco，美国）；胎牛血清（Gibco，美国）；无钙镁 PBS（Gibco，美国）；谷氨酰胺（Gibco，美国）；2-巯基乙醇（Gibco，美国）；I型胶原酶（Sigma，美国）；丙醇酸钠（Gibco，美国）；Dispase（Sigma美国）；非必须氨基酸（Gibco，美国）；青链霉素（Gibco，美国）；ALP试剂盒（Millipore，美国）；白血病抑制因子（Gibco，美国）；0.25%胰蛋白酶（Sigma美国）；抗小鼠一抗：OCT4（Santa Cruz Biotechnology， 美 国）；SSEA4（Santa Cruz Biotechnology，美国）；FITC 或 Rhodamine标记的兔抗羊或羊抗兔二抗（Santa Cruz Biotechnology，美国）。

4.主要仪器：低温高速离心机（北京医用离心机厂）；倒置相差显微镜及照相系统（Olympas，日本）；二氧化碳恒温孵箱（Forma，美国）；YJ-875型超净工作台（苏州净化设备厂）；……