安冬颖，于轩，李文华，王一凡

朝阳市第二医院1血液内科，2检验科，辽宁朝阳1220000

弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤的常见类型，临床主要表现为侵袭性和中高度恶性，病情发展迅速，严重威胁患者健康[1]。DLBCL主要发生于淋巴结内，部分病灶发生于淋巴结外，结外病灶常见于胃肠道、骨和中枢神经系统[2]。DLBCL初期患者常出现快速生长的淋巴结，同时伴有发热、盗汗和消瘦等症状。目前，临床主要采用基因和蛋白质检测的方法进行DLBCL的诊断和预后，其中肿瘤标志物对DLBCL诊断有重要的意义[3]。FOXP1是FOXP亚家族转录因子成员，FOXP1蛋白是一种转录因子，与胚胎正常发育、心肌细胞发育、人类及禽类语言形成等有密切的关系，同时与乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌和结肠癌等相关[4]。目前，FOXP1与DLBCL关系的研究报道较少，本研究将DLBCL患者与健康人体内的FOXP1水平进行分析，探讨DLBCL患者血清FOXP1的表达情况及其对DLBCL患者预后的影响，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2014年6月至2017年6月于朝阳市第二医院接受治疗的80例DLBCL患者（观察组）和80例同期体检的健康成年人（对照组）。观察组患者的纳入标准：①年龄≥18岁；②经骨穿刺等检查确诊为DLBCL；③无其他血液系统疾病；④对本研究知情同意。排除标准：①病历资料不全；②不愿参与本研究；③合并其他系统严重疾病。对照组受试者需满足：年龄≥18岁，对本研究知情同意，无免疫和血液系统等严重疾病。观察组80例患者中，男48例，女32例；年龄32～78岁，平均（50.36±5.27）岁；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期50例。对照组80例受试者中，男40例，女40例；年龄35～78岁，平均（50.32±6.03）岁。两组受试者的年龄和性别等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经朝阳市第二医院伦理委员会评审通过。

1.2 检测指标与方法

两组受试者血清FOXP1均采用免疫组化法进行检测。采用酶联免疫吸附测定法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）检测C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）细胞因子水平。

1.2.1 免疫组化法 将组织标本固定，石蜡包埋、切片，常规脱蜡10 min、2次，在95%、75%、50%的乙醇溶液中各水化5 min。3%过氧化氢溶液阻断内源性过氧化物酶，三乙醇胺缓冲盐水溶液（tris buffered saline，TBS）缓冲液冲洗，枸橼酸缓冲液抗原热修复3 min，一抗4℃过夜。取出后置于37℃恒温箱中复温45 min，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）冲洗5 min、3次，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）染色，苏木精复染。FOXP1抗体（武汉博士德生物工程有限公司）按照1∶75稀释，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.2 ELISA法 取受试者空腹静脉血2 ml，乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）抗凝，离心提取血浆，-20℃冷藏箱保存，按照CRPELISA试剂盒（上海蓝基生物科技有限公司）操作步骤进行检测。

1.3 统计学方法

SPSS 11.5统计软件分析数据，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验；采用Logistic回归分析法分析影响DLBCL患者FOXP1表达的因素，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组FOXP 1阳性表达率比较

观察组患者FOXP1阳性表达率为72.5%（58/80），明显高于对照组受试者的20.0%（16/80），差异有统计学意义（χ2=46.582，P＜0.01）。

2.2 观察组FOXP 1表达与临床特征的关系

观察组临床特征中年龄≥65岁、Ⅲ+Ⅳ期、CRP≥10 U/L、淋巴瘤国际预后指数（international prognostic index，IPI）高危、有症状的患者FOXP1表达阳性率明显高于年龄＜65岁、Ⅰ～Ⅱ期、CRP＜10 U/L、IPI中低危、无症状的患者，差异均有统计学意义（P＜0.01），而不同性别患者的FOXP1表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

表1 观察组80例患者FOXP 1表达与临床特征的关系

2.3 观察组FOXP 1表达的影响因素分析

将单因素分析有意义的年龄、临床分期、CRP、IPI是否高危、有无症状作为自变量，将DLBCL患者FOXP1阳性表达作为因变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示临床分期Ⅲ+Ⅳ期和IPI高危为FOXP1表达的影响因素（OR=4.416、4.879，P＜0.01）。（表 2）

表2 观察组患者FOXP 1表达的影响因素分析

3 讨论

DLBCL是一类在临床表现、组织形态和预后方面具有异质性的淋巴瘤，在中老年人群中比较常见[5-6]。DLBCL发病部位可分为淋巴结内和淋巴结外的器官组织，淋巴结内DLBCL患者的临床症状表现为淋巴结进行性肿大，随着病情加重DLBCL发生扩散，具有侵袭性；淋巴结外DLBCL涉及的器官和组织较多，因此生物学行为和临床症状比较复杂，但主要表现为组织器官存在迅速增大的肿块，并伴有一定的症状出现。

目前，Ⅰ～Ⅱ期DLBCL患者采用放化疗及其他综合治疗，Ⅲ～Ⅳ期主要采用化疗。常用的化疗药物包括环磷酰胺、氮芥和甲基苄肼等烷化剂，综合治疗的原理和优势在于全身化疗可以有效地控制远处器官亚临床转移，而放疗可以有效地控制局部复发，治疗后约50%的DLBCL患者可治愈[7-10]；但仍有部分患者治疗效果差或治愈后易复发，因此选择灵敏准确的分子标志物，识别预后不良的高危患者，对DLBCL患者的治疗和预后有重要的意义。然而，目前尚无明确的预后分子标志物[11-16]。国内外研究报道显示，FOXP1在多种肿瘤组织中高表达，可以作为肿瘤预后的不良指标[17]。FOXP1是FOXP亚家族的成员之一，其在B淋巴细胞的不同时期均有表达，但在浆细胞中不表达[18-21]。有研究表明，在细胞、组织和器官发育的不同时期FOXP1表达或沉默，可以维持或影响机体的不同生理状态，若这个机制被破坏，机体的正常功能发生紊乱，FOXP1表达异常时，B淋巴细胞分化和成熟受到影响，容易产生B细胞淋巴瘤[22]。但是，目前有关FOXP1与DLBCL相关性以及DLBCL预后中FOXP1作用的研究报道较少。

本研究将DLBCL患者与健康受试者的血清FOXP1表达水平进行对比分析，DLBCL患者的FOXP1阳性表达率明显高于健康受试者，差异有统计学意义（P＜0.01）。这个结果说明FOXP1可能参与了DLBCL病情发展。已有研究表明，FOXP1阳性表达率越高，肿瘤患者年龄越大、分期越晚、CRP水平越高、IPI高危概率越大[22]。本研究通过对不同临床特征DLBCL患者的血清FOXP1表达水平比较显示，年龄≥65岁、Ⅲ+Ⅳ期、CRP≥10 U/L、IPI高危、有症状的DLBCL患者FOXP1表达阳性率明显高于年龄＜65岁、Ⅰ+Ⅱ期、CRP＜10 U/L、IPI中低危、无症状者，差异有统计学意义（P＜0.01）。这个结果说明可以通过检测DLBCL患者的FOXP1表达水平制定临床治疗方案，同时FOXP1表达水平也可以作为评估患者的病情和治疗效果的重要指标。本研究分析了DLBCL患者血清FOXP1表达水平的影响因素，临床分期Ⅲ+Ⅳ期和IPI高危的OR值分别为4.416、4.879，P＜0.01，说明两者均与FOXP1阳性表达密切相关。

本研究的创新之处是将FOXP1作为DLBCL的分子标志物，研究FOXP1在DLBCL患者体内表达及临床意义，弥补了以往临床研究对DLBCL患者分子标志物的空缺。但本研究选取人数较少且范围较窄，会对研究结果产生一定的影响，需要在后续研究中扩大研究对象的数量和范围进一步验证。

综上所述，DLBCL患者血清FOXP1表达水平较高，且与临床分期情况、IPI是否高危有关。

[1]胡成如,王靖华,耿怀成,等.叉头框转录蛋白1在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义[J].临床肿瘤学杂志,2012,17(4):339-342.

[2]张亚楠,刘汉锋.FOXP1蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义[J].重庆医学,2015,44(17):2368-2370.

[3]苏智祥,张燕军,张娟,等.弥漫性大B细胞淋巴瘤患者FOXP1、PIM1与P-gp的表达及相关性研究[J].临床医学研究与实践,2016,1(25):37-38.

[4]李敏,刘翠苓,尹文娟,等.中国人弥漫大B细胞淋巴瘤新分类模型的预后分析[J].中华血液学杂志,2012,33(10):801-804.

[5]王志芳,刘岩,肖丽,等.大剂量化疗联合香菇多糖治疗难治性弥漫大B细胞淋巴瘤的效果及FOXP1与Livin蛋白的表达[J].解放军医药杂志,2017,29(8):97-102.

[6]Gascoyne DM,Banham AH.The significance of FOXP1 in diffuse large B-cell lymphoma[J].Leuk Lymphoma,2017,58(5):1037-1051.

[7]姚伟凯,王银萍,彭芳,等.树突细胞标志物CD21的表达是弥漫性大B细胞淋巴瘤的有利预后因素[J].中华病理学杂志,2012,41(12):818-822.

[8]黄文亭,吕宁,郭蕾.c-myc基因在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的意义及其应用[J].中华病理学杂志,2013,42(9):638-640.

[9]张勇,张秀英,贾潇,等.FOXP1在重症肌无力患者外周血B淋巴细胞中的表达和临床意义[J].徐州医学院学报,2016,36(7):441-445.

[10]李蒲,李菲,陈艳,等.CD68+淋巴瘤相关巨噬细胞在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义[J].国际输血及血液学杂志,2014,37(6):507-511.

[11]陈卫群,卢宏达,孔德勇,等.弥漫性大B细胞淋巴瘤患者血清和细胞中miR-21的表达及其临床意义[J].中华检验医学杂志,2012,35(5):431-435.

[12]刘剑,尚鑫,沙素梅,等.转录因子FOXP1在胃癌组织中的表达及意义[J].现代生物医学进展,2014,14(5):814-818.

[13]潘红阳,张昕霞,翁媛媛,等.GCET2兔单克隆抗体的制备及其在弥漫性大B细胞淋巴瘤中初步应用[J].中华病理学杂志,2016,45(12):844-849.

[14]李海英,张力,杨开颜,等.基于Logistic回归模型的弥漫性大B细胞淋巴瘤分型研究[J].中华肿瘤防治杂志,2012,19(12):908-912.

[15]夏靖媛,徐薪.FOXP1与Livin基因表达对淋巴瘤病理特征及临床预后评价价值[J].武警医学,2016,27(12):1237-1240.

[16]赵亦菲,钱申贤.CD30在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义[J].中国实验血液学杂志,2016,24(3):717-721.

[17]黄珊,赵凤,刘迪,等.lncRNA MALAT1在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者中的表达及其临床意义[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2017,24(9):1002-1005.

[18]周颖,赵瑜,薄剑,等.Ki-67在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义[J].中国实验血液学杂志,2013,21(5):1162-1166.

[19]胥琴,刘华,郭恩松,等.FOXP1在人卵巢癌细胞系C13和OV2008中的表达及其意义[J].中国妇幼保健,2014,29(4):593-595.

[20]王艳,邢莉民,徐文艳,等.弥漫大B细胞淋巴瘤患者骨髓中淋巴瘤相关巨噬细胞数量变化及临床意义[J].山东医药,2017,57(12):16-19.

[21]郑一鸣,郭建昇.FOXP1在结直肠癌中的表达及意义[J].山西医科大学学报,2017,48(6):602-604.

[22]朱皓皞,杜丽英,熊敦勇,等.E2F-1、NF-κB/P65、P-gp在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及意义[J].实用癌症杂志,2013,28(2):150-154.