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胡椒碱的提取分离及检测方法的研究进展

2018-05-14张晓旭周锡钦刘红芹徐宝财

热带作物学报 2018年5期
关键词:进展检测

张晓旭 周锡钦 刘红芹 徐宝财

摘 要 胡椒碱是胡椒中的主要活性成分之一,具有抗炎、抑菌、抗氧化等活性,更有潛力被开发为新的抗癌药物。本文重点介绍胡椒碱的提取分离方法以及检测方法,以期为相关的科学研究提供参考。

关键词 胡椒碱;提取分离;检测;进展

中图分类号 Q949.732.3 文献标识码 A

Abstract Piperine, which is one of the main active ingredients of pepper, has many biological activities, such as the anti-inflammatory, antibacterial, anti-oxidation and so on. It also has the potential to be developed as a new anticancer drug. In this paper, the extraction, separation and determination methods of piperine are introduced as the focal points, with a view to provide references for relevant scientific research.

Key words piperine; extraction and separation; determination; progress

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.05.030

胡椒(Piper nigrum Linn.)又名白川、浮椒及王椒,是胡椒科、胡椒属常绿热带藤本植物,原产于印度,1947年引入中国,在海南省、云南省西部、广东省湛江地区、广西南部和福建省云宵县部分地区等都有种植,其中海南省是主产区。目前胡椒的种植面积超过3×104 hm2,占世界总面积排名第6位,年总产量超过3×107 kg,世界排名第5位。胡椒的未成熟果实干后,去皮皱缩为黑,称之为黑胡椒,成熟果脱皮而白,称之为白胡椒。胡椒中的活性成分主要是酰胺类化合物,其中尤以胡椒碱活性最强、含量也最多。胡椒碱不仅可以作为香料和调味料,还具有非常重要的药用价值,如抗炎镇痛、抗肿瘤、抗惊厥、抗抑郁、健胃、抑菌、降血糖和肝保护作用等[1-6]。另外,胡椒碱对羟基有较好的清除作用,还可作为抗氧化剂[7]。同时胡椒碱也被证明可以提高四环素、链霉素、异烟肼和乙胺丁醇等药物的生物利用度[8]。已有研究表明,胡椒经加工后可得到胡椒碱,其附加值可提高10倍[9]。由于胡椒碱的功能作用,无论是食品工业还是医药工业中都需要更高纯度的胡椒碱,因此,开发出纯度更高、质量好、产率高、成本低的天然胡椒碱产品进入世界市场,将有利于发展中国的胡椒产业,对提高农产品的经济价值和综合利用率等都有着重要的意义。

目前胡椒碱的提取方法主要有有机溶剂提取法和酸水解法等,胡椒碱的含量测定方法主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法和薄层色谱法等。本综述主要分析、总结近年来国内外提取分离和测定胡椒碱的一些研究报道,以期为相关方面的科学研究提供参考。

1 胡椒碱的提取分离

1.1 超临界流体萃取(Supercritical fluid extraction,SFE)

SFE特别适合富含生物活性的天然物质的提取分离,它是以超临界流体作为萃取媒介,利用超临界流体的溶剂化效应溶解待分离的液体或固体混合物,然后通过减压或调解温度来降低其密度,从而降低其溶剂能力,使萃取物得到分离。SFE因具有分离工艺简单、萃取效率高等特点而被广泛应用到食品、医药和化工领域等,其中以CO2 为溶剂的SFE技术因其对有机物溶解能力强、选择性好,且CO2无毒、惰性、易得,已成为SFE技术中最为重要的研究和应用技术。

Andrade等[10]采用超临界CO2法提取胡椒中的胡椒碱,研究表明最佳提取工艺条件为:提取温度为40 ℃,压力为200 bar,无水乙醇添加量为7.5 %(V:V),CO2恒定溶剂流速为(8±2) g/min。Dutta等[11]利用超临界CO2法提取胡椒中的胡椒碱,从20 g平均粒径为0.42 mm的胡椒粉中提取胡椒碱的最佳条件为:提取温度为60 ℃,压力为300 bar,提取时间为45 min,CO2流量为2 L/min。Grinevicius等[12]采用超临界CO2法从黑胡椒中提取抗肿瘤活性物质,研究表明,其主要成分为胡椒碱和萜类化合物,当提取温度为40 ℃,压力为200 bar,CO2流量为(8±2) g/min时,提取物的抗肿瘤活性最高,此时提取物中胡椒碱的含量也最高(6.035±0.014)%。

1.2 酶辅助超临界二氧化碳提取

酶辅助超临界二氧化碳提取技术是一种比较新兴的试验手段,可以更加有效地提高胡椒碱的提取产率。Dutta等[11]利用此方法提取黑胡椒中的胡椒碱,所用酶为α-淀粉酶(来自地衣芽孢杆菌),研究对比了酶添加前后胡椒碱提取物产率的变化,并在分批和连续模式下进行优化实验。研究表明最佳酶配比为:酶量:黑胡椒粉=1:5 000,时间为2.25 h,CO2流量为2 L/min。在连续模式下,酶的比活性提高了2.13倍,批量模式呈现1.25倍增加,同时胡椒碱提取物的产率均有明显增长。

1.3 酶法提取

酶法提取中草药活性物质是提取工艺的一大发展,近年来酶技术在植物有效成分提取方面的研究已有不少,其中纤维素酶的应用最为广泛,效果也较为显著。植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶,添加纤维素酶能有效地破坏细胞壁,从而有利于细胞中的活性成分的溶出。利用超声辅助酶法可进一步强化纤维素的酶解作用,提高目标物质的提取率。刘笑[13]利用纤维素酶提取白胡椒中的胡椒碱,在单因素试验基础上进行条件优化,确定3.0 g白胡椒粉中提取胡椒碱的最佳工艺为:纤维素酶为6 mg,酶解温度为50 ℃,酶解液pH值为7,时间为6 h,此条件下提取物中胡椒碱的含量可达5.29 %。

1.4 有机溶剂法

胡椒碱几乎不溶于水,微溶于乙酸,可溶于苯或醋酸,易溶于氯仿和乙醇,因此可用有机溶剂法萃取。徐士明等[14]利用85%的乙醇提取胡椒中的胡椒碱,确定最佳工艺条件为:回流提取2次,乙醇(体积):胡椒(质量)为10:1,滤液合并,浓缩,动态冷却结晶,无水乙醇多次结晶,提取的胡椒碱纯度大于98 %。Subramanian等[15]用甲醇作为萃取溶剂,利用索氏抽提技术提取胡椒中的胡椒碱,测得粗胡椒碱的含量为3.80%。

1.5 超声波辅助有机溶剂萃取法

超声波辅助有机溶剂萃取法是一种现代的分离方法。超声波的空化作用会产生极大压力,提高细胞壁的通透性,有助于细胞中有效成分的迅速释放。同时超声的振动效应和热效应可增加传质系数,增大溶质的接触面积,进而增加溶质的溶解度。该法具有时间短、效率高和常温即可进行的优点,被广泛应用于天然物料的提取分离[16]。Rathod等 [17]采用超声辅助有机溶剂法从胡椒中提取胡椒碱,用乙醇作为提取溶剂,提取时间18 min,料液比为1:10,超声功率为125 W,超声频率为25 kHz,温度为50 ℃。研究表明胡椒碱的提取效率比传统的有机溶剂提取法要高。陈盛余等[18]采用超声波辅助有机溶剂萃取法从胡椒中提取胡椒碱,最佳工艺条件为:乙醇体积分数为95%,提取时间为45 min,提取温度为70 ℃,料液比1:30(g:mL)。此条件下,提取物中胡椒碱的含量可达6.12 %。

1.6 加压液体萃取法(Pressurized liquid extraction,PLE)

加压液体萃取法(PLE)是由连续溶剂流过固定的含有固体颗粒的萃取柱进行萃取,其特点是需要溶剂较少且具有较高的提取效率,同时还可减少萃取时间[19-20]。Andrade等[10]用乙醇作为PLE溶剂,将20 g研磨的黑胡椒粉装入提取容器中,压力设置为100 bar,温度为40 ℃,乙醇流速保持在3 mL/min,提取时间为60 min。

1.7 离子液体的超声波辅助提取法(Ionic liquid-based ultrasonic-assisted extraction,ILUAE)

Cao等[21]采用基于系列1-烷基-3-甲基咪唑离子液体的超声波辅助提取法(ILUAE)从白胡椒中提取胡椒碱,评价了烷基链长度和阴离子种类对胡椒碱的提取效率的影響,结果表明其对胡椒碱的萃取效率都有显著的影响。

1.8 微波辅助有机溶剂提取法

微波辅助有机溶剂提取法的原理是以溶液内的离子和分子接受微波辐射获得能量而升温为基础,从而提高溶质进入溶剂的能力,此方法的优点是耗能低、时间短、效率高并可节省萃取剂的使用

量[22]。王友志等[23]采用微波辅助有机溶剂法提取胡椒中的胡椒碱,确定最佳提取工艺为:乙醇浓度为80 %,微波功率为500 W,提取时间为60 min,提取温度为55 ℃,料液比80:50,此条件下提取物中胡椒碱的含量可达4.12 %。

1.9 超声波—微波协同萃取法

超声波—微波协同萃取仪中设有冷凝装置,可以极大提高胡椒碱中胡椒油树脂的得率,减少其挥发性成分的损失。吴桂苹等[24]以黑胡椒为主要原料,研究热回流提取、索氏抽提和超声波—微波辅助等提取方法对胡椒油树脂得率的影响,并用HPLC分析测定胡椒碱的含量。结果表明,不同提取方法所得胡椒油树脂及胡椒碱含量有显著性差异,其中超声波—微波协同萃取法得到的胡椒油树脂的得率最高。

1.10 酸水解法

胡椒碱在水中基本不溶,可以在水中加入酸使得胡椒碱转化为相应的胡椒碱盐溶解于水中,从而被提取出来。Aziz等[25]采用醋酸作为提取溶液从黑胡椒中提取胡椒碱,15 g黑胡椒使用500 g溶剂,提取物中胡椒碱的含量可达3.0 %。

比较、分析胡椒碱的提取效果及工艺参数,总结出了各种提取方法的优缺点(表1)。

2 胡椒碱的检测方法

有关胡椒碱纯度的测定,人们已经进行了大量的研究。目前最常用的方法有高效液相色谱法(HPLC)、紫外分光光度法和薄层色谱法等。

2.1 高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)

HPLC法作为一种新型的分离分析技术,简便、灵敏、准确、专属性强,是当今使用最为广泛的技术方法。王新灵等[26]利用HPLC法检测胡椒中的胡椒碱,色谱柱为Diamonsil C18柱,流动相为甲醇,流速为0.25 mL/min,柱温为25 ℃,进样量为0.2 μL。杨秋霞等[27]采用HPLC法测定八味肉桂胶囊4种成分的含量,所用色谱柱为5C18-MS-II柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm),乙腈—1%的乙酸梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm,柱温为35 ℃。研究结果表明胡椒碱的平均回收率为100.46 %,RSD为2.41%(n=6)。

2.2 反相高效液相色谱法(Reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)

RP-HPLC法具有操作简便、可靠性高、准确性高和重现性好的优点。叶静等[28]建立了一种测定红花如意胶囊中胡椒碱含量的 RP-HPLC法。他们采用Kromasil C18色谱柱(150 mm × 4.6 mm,5 μm),以甲醇—水(64:36,V:V)为流动相,流速为 1.0 mL/min,检测波长为343 nm,柱温为30 ℃。研究表明胡椒碱含量在0. 0416~0. 228 μg范围内呈良好的线性关系(r2 =0.999 8),平均回收率为98.82%(n = 6),RSD为1.1%。黄毅等[29]利用RP-HPLC法测定牙膏中胡椒碱的含量,色谱柱是Kromat Universil C18柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇—水(70:30,V:V),检测波长为343 nm,流速为1 mL/min,柱温为35 ℃,研究表明胡椒碱在0.5 ~15 μg/mL范围呈良好的线性关系(r2=0.999 9),胡椒碱的平均回收率在92.09%~118.20%之间。Shah等[30]采用RP-HPLC法检测胡椒碱的含量,他们采用C18柱,流动相为二氢正磷酸氢钾(pH=6.5)—乙腈(30:70,V:V),流速为1 mL/ min。

2.3 反相高效液相色谱—二级管阵列法(Reversed phase high performance liquid chromatography diode array detector,RP-HPLC-DAD)

Lu等[31]采用RP-HPLC-DAD方法检测黑胡椒中的胡椒碱含量,所用色谱条件:Zorbax-SB C18柱(4.6 × 150 mm,3.5 μm;Agilent,Santa Clare,USA);流动相A为0.1%磷酸水溶液,流动相B为100 %乙腈;梯度洗脱:0 ~25 min,2%~ 25% B,25~32 min,25%~ 40% B,32~40 min,40%~50% B,40~50 min,50%~70% B;流速为0.75 mL/min;检测波长为280 nm;柱温为30 ℃;进样量为25 μL。

2.4 紫外分光光度法

紫外分光光度法是一种测定胡椒碱含量的通用方法,具有操作简单、方便快捷的特点。Grinevicius等[12]采用紫外分光光度法确定了胡椒提取物中胡椒碱的存在。杨敏等[32]利用紫外可见分光光度法测定荜茇药材中的胡椒碱含量,溶剂为无水乙醇,检测波长为343 nm,研究表明胡椒碱在0.398~7.952 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r2=0.9995,n=6),RSD=1.10%。此方法检测速度快、方便,但也存在准确度不高、灵敏度较低和干扰物质多等一些问题。

2.5 薄层色谱法(Thin layer chromatography,TLC)

薄层色谱法是近几年发展的快速分离和定性分析微量物质的一种很重要的实验技术,属于固—液吸附色谱。此方法简便易行、灵敏、准确,还具有样品用量少、有机溶剂消耗少、检测迅速和无固定相污染等优势。Rajopadhye等[33]研究了胡椒属植物中胡椒碱的薄层色谱定量法,在GF254硅胶板上,用甲苯—乙酸乙酯—乙醚(6:3:1,V:V:V)展开体系将胡椒碱进行了有效的分离。分离后的试样在波长337 nm下扫描定量,胡椒碱的线性范围为15~75 ng,加标回收率为94.53%。Samten等[34]建立了一种简便廉价的TLC圖像分析方法,用于定量不丹传统药用制剂中胡椒碱的含量。他们使用数码相机拍摄254 nm波长紫外光下的TLC色谱图像,并利用Scion Image软件进一步将其转化成密度剖面图,通过将其峰面积与在相同TLC板上的胡椒碱标准品建立的校准曲线进行比较来计算胡椒碱的浓度。校正数据的线性回归分析显示响应与胡椒碱含量之间呈线性关系(r2= 0.996 2)。该方法的特异性、精度、准确度和恢复率都令人满意,缺点是其灵敏度稍低,检测限为15.36 ng。

2.6 高效薄层色谱法(High Performance thin-layer chromatography,HPTLC)

HPTLC是TLC的增强形式,与HPLC和GC同属痕量分析方法,可提高薄层色谱的分辨率,具有分离度好、准确性高、低成本和高效率等特点。Alam等[35]利用HPTLC定量分析黑胡椒中的胡椒碱,流动相是甲苯—乙酸乙酯—冰乙酸(7:3:0.5,V:V:V),薄层色谱板是玻璃背面的硅胶60F-254板,扫描波长为280 nm。

2.7 气质联用法(Gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)

Hussain等[36]利用GC-MS测定黑胡椒中的胡椒碱含量。使用的柱子是RTx?-1(30 m × 0.32 mm × 0.25 μm);升温程序:初始温度60 ℃,保持60 s,然后以10 ℃/min速率升温至180 ℃并保持1 min,继续以20 ℃/min速率升温至280 ℃,保持15 min;载气为氦气(99.99%);电子电离(EI)电压为70 eV。

2.8 气质联用薄层色谱法

Delia[37]采用GC-MS联用薄层色谱法鉴定黑胡椒中的胡椒碱,先采用薄层色谱法对胡椒碱进行鉴定,使用的薄层板是Polygram Sil G/UV 254 Macherey Nagel,流动相为甲苯—乙酸乙酯(70:30,V:V),UV检查器(254,366 nm)。之后采用气质联用技术对胡椒碱的含量进行定量,气相色谱柱是MP-MS柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm),载气为氦气,温度程序:初始温度60 ℃,然后以3 ℃/min的速率升温至250 ℃。研究结果表明该方法具有检测迅速、简便易行、灵敏且样品用量少和有机溶剂消耗少的优点。

2.9 高效毛细管电泳法(High performance capillary electrophoresis,HPCE)

HPCE是依据样品各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法,具有电泳和色谱技术的双重优点。李和光等[38]利用HPCE鉴定白胡椒中的胡椒碱。电泳条件:石英毛细管柱(50 μm × 90 cm),缓冲液为Na2HPO4和NaH2PO4,分离电压为28 kV,温度为25℃,检测波长为343 nm。研究结果表明胡椒碱在0.05~0.30 mg/mL范围内呈良好的线性关系(r2= 0.999 5)。但该方法存在一些弊端,如电渗会因样品组成而变化,进而影响分离重现性。

2.10 核磁共振法

核磁共振技术被广泛用于分子结构的测定,并且还可用于定量分析,其原理是核磁共振信号的积分强度直接与该信号所代表的原子核数呈正比。赵丹[39]利用核磁共振一维和二维技术对胡椒碱进行结构解析,并利用核磁共振氢谱定量分析胡椒碱的含量,经过对比实验,证明此方法操作简单、灵敏度高且重现性好。

2.11 高效液相色谱—串联质谱法(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)

LC-MS/MS技术是把具有高分离能力的液相色谱和可以提供结构信息的质谱结合起来,具有高灵敏度、选择性的优势,尤其是串联质谱技术的应用,可以得到丰富有效的化合物结构信息,从而建立快速、高效的分析研究体系。吴惠勤等[40]利用LC-MS/MS法测定地沟油中难挥发性微量杂质成分之一的胡椒碱。样品经过提取分离后,在电喷雾正离子模式下以多反应监测方式采集数据并进行定性和定量测定。实际样品测试表明,该方法简便快速、灵敏可靠,可作为地沟油鉴别的重要手段之一。Chithra等[41]从胡椒中分离出内生真菌,然后利用HPLC法和LC-MS/MS法确定了内生真菌分离物中胡椒碱的存在。Chen等[42]利用UPLC-MS/MS法测定血浆中的胡椒碱含量。样品通过液—液萃取(LLE进行预处理,0.2 %的甲酸—乙腈(50:50,V:V)等度洗脱,时间控制在5 min内,色谱柱是C18柱,正离子扫描,选择性反应检测,电喷雾电离,维拉帕米用作内标(IS)。当胡椒碱浓度为1~1000 ng/mL时,此方法具有良好的线性关系(r2=0.999),且具有良好的回收率、精密度和稳定性,检测限为1 ng/mL。

2.12 极谱法

胡椒碱化学结构中含有2个C=C键,在酸性条件下可在滴汞电极上发生还原反应,产生良好的一阶导数差示脉冲极谱峰。韩文彬等[43]据此建立了胡椒碱的一阶导数差示脉冲极谱定量测定法(FD-DPP),实验表明,胡椒碱的FDDPP峰电位为-0.86 V(pH=4.60),可作为胡椒碱的定性参考。此法操作简便、快速、选择性较好。

2.13 电喷雾电离质谱法(Electrospray ionization mass dpectrometr,ESI-IT-MS)

ESI-IT-MS作为一种较新的分析手段,越来越广泛地被人们所利用。该方法检测快速,可有效与各种色谱联用,用于复杂体系分析,并且可同时提供精确的分子质量和结构信息。Grinevicius等[12]采用ESI-IT-MS法确定了胡椒提取物中胡椒碱的存在。该方法的缺点是每一个电喷雾的变量如真空度、电势、溶剂的挥发性、溶液的导电性、电解质的浓度和样品液的各种物理特性等都有一个应用的限制范围,另外,实验参数或技术条件必须根据需要解决的问题去仔细选择。

2.14 胶束电动色谱法(Micellar electrokinetic chromatography,MEKC)

MEKC是一种非常有效的分离分析方法,被分离组分在流动相和由胶束构成的固定相之间分配,由于其在两相之间的保留能力不同而实现分离。Carolina等[44]采用MEKC分离鉴定花蜜中的生物碱—胡椒碱。Capel?105M毛细管电泳仪;熔融石英毛细管长57 cm(有效长度50 cm);毛细管处理程序:依次用蒸馏水、0.1 mol/L NaOH溶液、蒸馏水各清洗5 min,最后用缓冲液(20 mmol/L硼酸钠,100 mmol/L SDS,pH 9.30)冲洗3 min;分离电压为20 kV;毛细管温度为25 ℃;样品以30 bar压力进样3 s;检测波长为220 nm;2次进样之间依次用用蒸馏水清洗3 min、0.10 mol/L的NaOH溶液清洗2 min、蒸馏水清洗2 min。

2.15 高效液相色谱分离与电喷雾电离三重串联质谱联用法(High performance liquid chromatography electrospray ionization mass spectrometry ,HPLC-ESI-MS/MS)

Liu等[45]建立了一种简便、快速、灵敏和准确的HPLC-ESI-MS/MS方法,可以同时鉴定分析荜茇中的5种特征组分:胡椒碱、荜茇明宁碱、Δα,β-二氢荜茇明宁碱、墙草碱和胡椒新碱。采用的色谱条件:Phenomenex Gemini C18反相柱(50 mm×2.00 mm,5 μm);流动相A为水(含0.1%甲酸),流动相B为乙腈(含0.1%甲酸);流动相梯度洗脱:0~0.50 min,2% B,0.50~3.10 min,2%~98% B,3.10~4.00 min,98% B,4.00~4.01 min,2%~98% B,4.01~5.50 min,2% B;流速:0.55 mL/min;柱温:室温;进样量:10 μL。質谱条件:采用 ESI电离源,正离子扫描,MRM检测模式。研究表明该方法显示出良好的特异性、线性(r2>0.995)、稳定性(RSD<2.53%)、重复性(RSD<2.58%)和回收率(90.0%~103.5 %)。Liu等[46]采用UFLC-ESI-MS/MS方法分析大鼠血浆中的胡椒碱,利用乙腈和乙酸进行梯度洗脱,研究表明该方法显示良好的灵敏度和较低的检出限(1.0 ng/mL),但该方法存在的主要问题是回收范围(86.6%~120%)较低。

经分析、对比总结出了检测胡椒碱的各种方法的利弊(表2)。

3 展望

胡椒碱作为胡椒中主要的活性化学物质,具有抗氧化和免疫调节等作用。目前,胡椒碱的提取分离和分析方法也有较为成熟系统的方法,比较各种提取分离和分析胡椒碱的方法,结果发现每种方法都各有其利与弊。

有机溶剂辅助微波、超声、加压等技术可提高胡椒碱的提取率,但仍存在有机溶剂残留的问题。水酶法以及酸水解法提取率较低并且工艺时间较长,且酶的活性易受多种因素影响,高浓度的酸对设备的腐蚀性比较严重,会造成环境污染。离子液体作为一种绿色溶剂,操作简单快速,但离子液体与目标物质难以分离限制了其发展,对离子液体的应用目前只停留在食品功能分子的提取与分析阶段,尚未在食品工业中大规模应用。超临界流体萃取分离工艺简单、萃取效率高,但生产成本较为昂贵。综合比较各种提取方法,超临界流体萃取技术作为一项具有特殊分离能力的新型技术,在中国已逐步走向工业化,有多种产品进入市场,具有较好的应用前景。

比较胡椒碱含量的测定方法可看出,高效液相色谱法、反相高效液相色谱、反相高效液相色谱—二级管阵列法、气质联用薄层色谱法、气质联用法、高效液相色谱—串联质谱法、高效液相色谱分离与电喷雾电离三重串联质谱联用法和核磁共振法,准确度高,此外液质与气质还能对胡椒碱进行初步的定性,但检测仪器价格昂贵,在检测前需要对样品进行前处理,方法相对较为繁琐,适用于科研单位对胡椒碱的深入研究。电喷雾电离质谱法、高效毛细管电泳法和胶束电动色谱法,对目标物质的提取率受样品的组成、样品液的物理特性的影响大,样品前处理过程较为繁琐。极谱法有一定毒性,应用受到一定限制。紫外分光光度法、薄层色谱法和高效薄层色谱法检测速度快、方便、成本相对较低,但准确度不高,且薄层色谱法多数用于胡椒碱的定性,适用于企业中对胡椒品质的快速检测与分级。所以对于胡椒碱的检测方法还有待进一步的研究和完善,需充分利用现有的高科技手段,研究新的分析方法,从而可以更加简单、快速、精确地对胡椒碱进行定量分析。

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