唐飞，徐娟，邵明君

(浙江金华市中心医院妇科，金华 321000)

众所周知，人类内分泌系统与免疫系统互相影响，雌激素(E2)通过影响细胞因子分泌而影响免疫功能[1]。本研究通过观察小鼠雌激素受体水平及白细胞介素13(IL-13)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量在不同生理阶段的变化，了解雌激素水平对小鼠免疫功能的影响，为临床雌激素治疗对绝经妇女免疫功能的影响提供实验依据。

材料和方法

一、实验动物

清洁级健康雌性C57BL/6小鼠60只，其中2月龄40只，10月龄20只。由杭州师范大学动物实验中心提供(SYXK(浙)2016-0014)。

二、研究方法

1.小鼠发情间期、妊娠期和绝经期的判定：采用阴道细胞学检查，用小棉签蘸取少量生理盐水，擦取小鼠阴道内分泌物顺时针涂在载玻片上晾干，用95%酒精固定，经苏木精-伊红染色后于10×10倍光镜下观察。若显微镜下见有大量白细胞及少量有核细胞为发情间期[2]，全部是无核角化细胞或间有少量上皮细胞为发情期；发情期小鼠雌雄交配后，第2天观察阴栓形成为妊娠；于妊娠12～15 d取标本。13月龄小鼠，1天1次显微镜观察阴道分泌物涂片，连续5 d内呈现不规则动情周期者为绝经期[3]。所有小鼠3月后进行实验，实验前4 h采用Con A(10 mg/kg)尾静脉注射。

2.实验分组和取材：2月龄小鼠随机分为发情间期组、妊娠组，10月龄小鼠拟为自然绝经组，每组20只。其中妊娠组、自然绝经组为实验组，发情间期组为对照组。

3. RT-PCR检测：新鲜取得小鼠脾脏组织100 mg，经液氮冰冻后Trizol法提取总RNA用以待测IL-13 mRNA、TNF-α mRNA和ERα、ERβ mRNA，引物由上海生工生物有限公司合成，β-actin基因作为内参基因(引物见表1)。……