刘 洁, 王宝亮, 钱仁义

河南中医药大学第一附属医院脑病科(郑州450000)

脑梗死发病率、致残率高，我国每年约有160万人死于此病。虽然现已确立了超早期溶栓治疗的有效性，但国际上的溶栓治疗时间窗严格限制在3～4.5 h内[1]。电针即将电刺激与传统中医的针灸相结合，被广泛应用于脑卒中临床及其机制研究动物模型中。研究表明，电针能有效减少脑水肿的形成及脑梗死的面积，并能改善脑血流的分布及对大脑有明显的神经保护作用[2]。PI3K/AKT信号通路是膜受体信号向细胞内转导的重要途径，同时大量实验中发现其在神经系统疾病中参与细胞增殖、分化、代谢等生物学活动[3-4]。因此本研究通过建立MCAO模型给予不同介入时间的电针治疗来阐明脑梗死后电针治疗最佳时间窗及其可能机制。

材料与方法

1 材 料

1.1 实验动物：健康的SPF级Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠126只，由我院实验动物中心提供，大鼠年龄大概在8周至10周，体重在250～280 g范围内，自由取食，2只大鼠共住一笼，在无菌的层流通风的动物饲养房中饲养，合格证号：SCXK(湘)2015-0004。实验操作部分在我院医学科学研究中心进行。

1.2 实验试剂：苏木素染色剂 Sigma 公司；一抗，兔抗大鼠Anti-VEGF(血管内皮因子抗体)，北京博奥森生物公司；二抗，羊抗兔IgG 抗血清，北京博奥森生物公司；即用型SABC 免疫组化试剂盒，武汉博士德生物公司；DAB染色试剂盒，南京凯基生物公司；其他免疫组化试剂,福州迈新生物公司；定量PCR试剂盒，Invitrogen Life Technologies公司；SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒，武汉谷歌生物技术有限公司；蛋白抽提试剂盒，武汉谷歌生物技术有限公司；……