王慧超，张 威，李铁军 ，许红玮

1.河南大学第一附属医院(开封 475000),2.河南中医药大学第一附属医院(郑州 450000)

中药白芍是干燥后的芍药根部，性温、味苦，具有镇痛、养血、收敛、柔等功效，临床上多用于肝火旺盛所致的血虚、腹痛、肋痛、肢痛等症[1-3]。在中药饮片中除了生白芍外还有多种白芍的炮制品，这些不同炮制法制备出的炮制品具有不同的功效。现代药理学研究表明，白芍中主要成分芍药苷是白芍发挥镇痛、抗炎等作用的组份。因此白芍与其炮制品在临床组方中主要发挥镇痛作用[4-6]。而芍药苷成分则成为白芍质量评价的主要指标。本院开展本次研究以明确不同白芍炮制品当中芍药苷的含量及其镇痛效果，旨在为今后临床用药的选择提供参考。

材料与方法

1 药品、仪器与试剂 本次研究所用白芍均购自同仁堂中药饮片公司。涉及试剂及仪器：芍药苷对照品、对乙酰氨基酚片、乙酸、甲醇、乙腈等试剂(北京万佳首化生物科技有限公司出品)。屈臣氏蒸馏水，高效液相色谱仪。

2 试验用动物 昆明小鼠(购自第四军医大学实验动力中心)，60只，雄性体重为18～22g。

3 炮制方法 ①生白芍，将白芍适度清洗后以蒸馏水浸泡至清透，正常切片后常规干燥。②炒白芍，将生白芍进行清炒，观察生品出现微黄色后停止炒制，自然冷却。③酒制白芍，将生白芍完全浸泡于白酒中12 h，以文火炒制浸酒后的白芍至出现微黄色停止，自然冷却。④醋制白芍，将生白芍完全浸泡于米醋中12 h，以文火炒制浸酒后的白芍至出现微黄色停止，自然冷却；⑤将生白芍与麸皮共同炒制，炒至生白芍呈黄色偶见焦斑时停止，自然冷却后筛去麸皮。每种各制备500 g。

将上述白芍炮制品研为粉末储存备用；自每种白芍制品粉末中各取0.64 g，均置于25 ml容量瓶当中，于瓶中加20 ml甲醇混匀后浸泡30 min，以超声处理30 min，自然冷却后以甲醇定容至容量瓶的刻度，充分混匀后过滤。对照品的制备，称取干燥芍药苷对照品0.38 mg，置于5 ml的容量瓶当中，以甲醇定容，取得0.76 mg/ml浓度的的芍药苷对照品。

4 检测方法 以高效液相色谱仪检测芍药苷含量，使用250 mm×4.6 mm，5 μm的C18反相色谱柱；流动相使用乙腈-水；检测波长为230 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为30 ℃。采用上述条件，进行方法学验证试验。芍药苷标准曲线的绘制，取对照品溶液2 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、12 μl检测，获取峰面积后与浓度共同绘制出标准曲线；取 10 μl的进样行重复实验，验证精密度；取同一批次的样品另外制备6份样品溶液，分别上样10 μl校验重现性；取6份测定含量后的样品溶液，以对照品溶液上样后测量，计算样品回收率。测量不同白芍炮制品的芍药苷含量，总共测量3次。

5 镇痛效果实验 将实验小鼠随机分为空白对照组、生白芍组、炒制组、醋制组、酒制组、麸炒组，每组各10只；以0.3%醋酸溶液于全部小鼠颈背部皮下注射。空白对照组小鼠以0.3 ml/10g(体重)蒸馏水灌胃；其它各组均取白芍炮制品30 g加入900 ml水中煎煮2次浓缩至30 ml，以0.3 ml/10 g(体重)灌胃。统计15 min内各组小鼠的扭体次数，以评估镇痛效果。

6 统计学方法 全部数据均录入至SPSS 20.0软件进行统计学计算，计量数据均以单因素ANOVA分析，进一步两两对比以LSD-L分析；相关性以Pearson分析，以P<0.05为具有统计学差异标准。

结 果

1 芍药苷含量 见表1。生白芍与各炮制品的芍药苷含量均具有差异性(P<0.05)，其中生白芍含量最高；在白芍制品中麸炒白芍的芍药苷含量最高为(63.26±0.19) μg。

表1 不同白芍炮制品芍药苷含量统计对比表

2 镇痛效果 见表2。各白芍泡制组扭体次数均少于空白对照组(P<0.05)；酒制组、醋制组间、炒制组、麸炒制组间无差异(P>0.05)；酒制组、醋制组间扭体次数少于生白芍组(P<0.05)；酒制组与醋制组镇痛效果最佳。

表2 小鼠镇痛实验结果统计对比表

注：与空白对照组对比，★P<0.05;与生白芍组对比,☆P<0.05

3 相关性分析 经相关性分析，镇痛效果与芍药苷含量间无统计学相关性(r<0.3，P<0.05)。

4 不同白芍制品性状 生白芍与不同白芍制品的性状观察见下表3所示。

表3 不同白芍制品性状观察特征描述明细

讨 论

白芍也称为白花芍药，为毛茛科芍药属的植物，在我国许多地区均有栽培，种植历史悠久。中医中不同白芍制品有着不同主治功效，这与其不同的化学成分相关。芍药苷为白芍的主要有效成分，具有退热解痉、护肝养肝之功效。生白芍具有敛固滋阴、强效平肝的作用，主要与其芍药苷的含量较高有关。白芍经过炒制后其芍药苷的含量稍有下降，药性更趋平缓，养血、滋阴的效果更加显著；因此多应用于肝火旺盛、脾弱阴虚之症。酒炒白芍能够提高其多糖与鞣质的含量，白芍含有的多糖及鞣质具有理想的抗氧化、调节免疫力等功效，并可辅助发挥镇痛作用，提高芍药苷的起效速度；因此酒制白芍能够和中缓急、快速镇痛，特别适用于产后镇痛当中。醋制白芍入肝经，加强了疏肝解郁、柔肝止痛之功效。麸炒白芍可加强养肝、柔肝的作用，缓解酸痛。中药的药理机制具有多层次、多靶点的特征，在临床治疗中具有独特优势。虽然中国药典中将芍药苷含量作为评估白芍质量的评价指标，但芍药苷的评估无法全面涵盖各种白芍炮制品的临床用途。以往中医中药的传承多以经验为主体，在精准性、数字性方面有所欠缺，因此在临床药理学研究中应对白芍不同制品进行全面研究，为临床应用的具体白芍制品选择提供依据。

白芍是中药组方中较为多用的一种中药饮片，最主要的功能为镇痛[7-8]。高效液相色谱法是检测药物有效成分的一种常用方法，该方法检测结果稳定可靠[9-10]。在测定芍药苷的含量时使用甲醇-水作为检测流动相无法分离芍药苷。本次研究中我们以乙腈-水作为流动相，测量过程当中的基线平稳，数据可靠，完全可以达到计划分离效果。浸泡12 h可使芍药苷的浸出达到最佳效果，超过12 h后随着浸泡时间的延长其含量可出现下降[11-12]。因此本次研究中，我们在炮制过程中均采取浸泡12 h，以确保芍药苷的含量被最大程度的浸出，且不会因浸泡时间过长而有所损失。

芍药苷成分在生白芍饮片中含量为最高，炒、酒、醋法炮制后芍药苷含量会有所降低[13]。不同炮制法的芍药苷含量数值为生品芍药大于醋炒芍药、醋炒芍药又大于酒炒芍药。另外白芍药中氨基酸、丹皮酚的含量亦受不同炮制方法的影响，因此，由于炮制方法的不同而引起的白芍多种成分的变化，即会使临证用药选择更有针对性。为进一步证明中药材经炮制后使用的科学性，现代药理学对于经炮制白芍进行了多项药理学研究，结果表明经几种方法炮制后的白芍其药效普遍增强，生白芍、炒白芍、醋炒白芍、酒炒白芍作用于离体兔肠，发现其自发振幅、收缩活动均呈现增强并与药物剂量的增加呈正比，而且醋炒白芍各项作用最强[14-15]。此外清炒、醋炒、酒炒白芍可明显拮抗肾上腺素性肠管蠕动抑制。以当代高科技炮制工艺针对中医临床用药需求对白芍的多种方法炮制技术进行研究，有利于传统炮制方法的革新，使中药炮制工艺更快的发展、进步，更加科学、标准，以保证中药材炮制产品的质量，促进我国中医中药更好的传承发展。

本次研究结果表明，生白芍当中的芍药苷含量最高，炒制品中的芍药苷含量最低。这一现象可能与芍药苷的性质并不完全稳定，而高温的炮制过程可能导致芍药苷含量部分丧失有关。通过动物镇痛实验证明，酒制白芍与醋制白芍的镇痛作用最为理想。通过相关性分析可知，芍药苷的含量与镇痛效果间无统计学相关性，这一研究结果提示芍药苷含量最高的生白芍具镇痛效果并非最理想。芍药苷的主要作用包含有镇痛、抗炎、利尿、解痉、清热等。因此在临床应用时应考虑主要治疗目的，并非单纯以芍药苷的含量作为用药选择的标准。

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