贾鹏晖，黄 琪，许凤清，金传山，2，王 培，马 凯，穆凤扬，吴德玲，2

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012； 2.安徽省现代中药重点实验室， 安徽 合肥 230012；3.亳州市永刚饮片厂有限公司，安徽 亳州 236800)

知母为百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBge.)的干燥根茎，具有清热泻火、滋阴润燥等功效[1]。知母主产于河北、安徽等地，其中河北为知母的道地产区，安徽知母栽培面积每年维持在5万亩左右，是知母主产地之一。知母须根较为发达，占根茎总量的20%～30%，而在知母产地加工过程中，须根作为非药用部位予以去除，大量的须根被丢弃，造成了巨大的资源浪费和环境污染。有研究表明，知母须根的主要化学成分与主根基本相同，且与主根在抗炎、抗菌解热及降血糖方面具有相当作用[2-3]。新芒果苷、芒果苷、异芒果苷为知母中主要酮类成分，其中新芒果苷与芒果苷均具有抗炎抗哮喘作用[4]，芒果苷还具有降血糖[5-6]，抗菌[7]及抗氧化[8]的作用，异芒果苷可以通过调节在游离脂肪酸吸收和脂质氧化上的基因表达水平，从而改善非酒精性脂肪肝[9]。知母酮类成分的含量测定一般选用紫外检测法，宋泽璧等[10]用高效液相紫外检测法测定盐炙前后知母中新芒果苷、芒果苷和异芒果苷的成分差异，刘敏等[11]用相同的分析方法考察炮制前后知母中新芒果苷与芒果苷的含量变化。本研究以知母须根为研究对象，采用高效液相二极管陈列检测法(high-performance liquid chromatography-diode array detection，HPLC-DAD)测定知母须根中新芒果苷、芒果苷及异芒果苷的含量，为知母须根的后续研究及其综合开发利用提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SHIMADZU LC-15C高效液相色谱仪；SHIMADZU LC-15C二元泵；SHIMADZUS SPD-15C检测器；Lab Solutions色谱工作站；万分之一电子天平(FA2004型，上海精科)；超声清洗仪(AS5150A型，Autoscience公司)；A10一体式超纯水机(美国Milipore公司)。

1.2 试药 新芒果苷(批号 64809-67-2)、芒果苷 (批号 111607-200402)、异芒果苷(批号 24699-16-9)均购于上海海灿生物科技有限公司，纯度均大于98%；乙腈(色谱纯)：Fisher；冰醋酸(分析纯)：天津市富宇精细化工有限公司；超纯水为实验室自制。知母须根采自安徽省亳州市，河北省安国市、易县等地区，由安徽中医药大学刘守金教授鉴定为百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBge.)的须根。

2 方法和结果

2.1 3个黄酮苷的含量测定

2.1.1 色谱条件 Shim-pack 色谱柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm)；流动相为乙腈(A)-0.4%冰醋酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～5 min，10% A；5～15 min，10%～12% A；15～25 min，12%～20% A；25～30 min，20%～10% A；30～35 min，10% A)，流速1.0 mL/min；柱温25 ℃；检测波长为258 nm。

2.1.2 对照品溶液的制备 取新芒果苷、芒果苷及异芒果苷对照品适量置容量瓶中，用50%甲醇溶解，制成新芒果苷0.53 mg/mL，芒果苷0.44 mg/mL，异芒果苷0.093 mg/mL的混合对照品溶液，于4 ℃冰箱储存，备用。

2.1.3 供试品溶液的制备 精密称取知母须根粉末(60目)0.1 g，精密加入50%甲醇25 mL，称定质量，超声(功率400 W，频率40 kHz)提取30 min，放冷后用提取溶剂补足减失的质量。过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.1.4 线性关系考察 精密移取上述混合对照品溶液 5 mL，加50%甲醇定容至10 mL量瓶中作为母液。并将母液分别按2、4、5、8、20倍依次稀释，得到系列混合对照品。分别吸取按不同倍数稀释的对照品溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，依“2.1.1”项下色谱条件测定。以各对照品进样质量(X)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得到新芒果苷、芒果苷和异芒果苷的回归方程。新芒果苷：Y=2 984 605.79X-113 272.73，r=0.999 9(n=6)；芒果苷：Y=3 939 885.24X-267 336.7，r=0.999 8(n=6)；异芒果苷：Y=3 590 453.43X-30 891.17，r=0.999 9(n=6)，结果表明新芒果苷、芒果苷、异芒果苷分别在0.26～5.25 μg、0.22～4.35 μg、0.046～0.930 μg范围内与峰面积线性关系良好，高效液相色谱图见图1。

注：1．新芒果苷；2．芒果苷；3．异芒果苷图1 混合对照品(A)和知母须根(B)高效液相色谱图谱

2.1.5 精密度试验 取混合对照品溶液，精密吸取对照品溶液20 μL，重复进样6 次，测定新芒果苷、芒果苷、异芒果苷峰面积，计算得其RSD值分别为2.45%、2.64%、2.89%，表明仪器精密度良好。

2.1.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样，进样量20 μL，按上述色谱条件测定新芒果苷、芒果苷、异芒果苷峰面积，计算得其RSD 值分别为0.63%、0.84%、1.27%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.1.7 重复性试验 取同一批样品(S-1)的须根粉末6份，按“2.1.3”方法制备6份供试品溶液，精确吸取20 μL，按上述色谱条件测定芒果苷、新芒果苷、异芒果苷含量，新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的平均含量分别为1.84%、1.53%、0.56%，RSD分别为1.74%、1.39%、2.89%(n=6)，说明该方法重复性良好。

2.1.8 加样回收率试验 精密称量样品(S-1)的须根粉末6份，每份约0.05 g，分别精密加入等量新芒果苷、芒果苷、异芒果苷对照品，按“2.2.3”方法制备供试液，在上述色谱条件下依次进样测定，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验

2.2 样品含量测定 实验收集了11批知母须根样品，样品来源于知母主产区安徽亳州，河北安国、易县，并在相同的条件下处理，取知母须根药材粉末(60目)，采用上述条件及方法对样品中新芒果苷、芒果苷及异芒果苷进行含量测定，结果见表2。

表2 不同产地知母须根中3种酮类成分含量测定

表2 不同产地知母须根中3种酮类成分含量测定

编号 产地样品水分/%新芒果苷/%芒果苷/%异芒果苷/%S⁃1亳州十九里镇马寨村6．241．841．530．56S⁃2亳州十九里镇陈小庙村7．831．801．280．39S⁃3亳州十九里镇马小楼村7．341．430．990．43S⁃4亳州十九里镇沈营村7．491．911．000．42S⁃5亳州十九里镇柳庄7．431．751．080．47S⁃6亳州十九里镇高庄村8．071．671．380．47S⁃7亳州十九里镇权庄7．661．361．230．40S⁃8安国焦庄8．571．561．500．60S⁃9安国樊庄7．691．561．190．46S⁃10易县西陵镇太平峪村8．371．711．550．65S⁃11易县西陵镇三尖峪村9．451．261．410．58

3 讨论

由上述结果可知，不同产地知母须根中新芒果苷的含量为1.2%～1.9%，芒果苷的含量为1.0%～1.6%，异芒果苷的含量为0.4%～0.6%。3种酮苷的平均含量大小依次为新芒果苷、芒果苷、异芒果苷。其中河北产的知母须根中芒果苷及异芒果苷含量平均值高于亳州地区，而新芒果苷的含量低于亳州地区，可能是知母的不同生长环境所致。

不同产地知母须根中芒果苷的含量均达到药典对知母主根的要求(0.7%)，说明知母须根中也含有丰富的酮类等有效成分，具有一定的综合开发利用价值。本研究可为提高知母资源的综合利用率提供依据。

实验考察了不同供试品处理方法、不同流动相及不同检测波长对实验结果的影响，最终确定以50%甲醇为溶剂，超声提取30 min，以乙腈-0.4%冰醋酸水溶液梯度洗脱，在258 nm条件下进行测定，形成较为稳定的含量测定方法，为知母须根的质量评价提供参考。

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