陈德才　王　雅　马从乾　杨　轲　陈　辉　陈德霞

(南阳市中心医院血管外科，河南　南阳　473000)

1南阳市中心医院肾内科2南阳市方城县人民医院血液净化科

血管瘤主要由先天性遗传疾病或血管畸形造成，婴幼儿时期多为良性肿瘤，成人时期多为恶性肉瘤，发病率为5%～10%〔1〕。研究表明，血管瘤内皮细胞的过度增殖和血管病理性形成是其主要的生物学特性〔2〕。血管瘤的发病机制尚不明确。目前认为血管瘤内皮细胞比正常内皮细胞侵袭、迁移能力更强〔3〕。研究表明雷帕霉素靶蛋白(mTOR)与细胞的生长、分化、侵袭、凋亡等过程密切相关〔4〕。 mTOR由mTOR复合物1和mTOR复合物2组成，mTOR雷帕霉素不敏感组分(RICTOR)是mTOR复合物2的支架蛋白〔5〕。研究表明mTOR复合物1和mTOR复合物2在肿瘤组织中高表达，推测RICTOR可能与血管瘤的发生、发展有关〔6〕。本实验通过RNA干扰技术沉默RICTOR基因表达研究其对血管内皮瘤细胞EOMA侵袭、迁移能力的影响及作用机制。

1　材料与方法

1.1实验材料EOMA小鼠血管内皮瘤细胞购自苏州北纳创联生物技术有限公司，高糖DMEM、胎牛血清(FBS)、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)抗体、磷酸化AKT(p-AKT)抗体、基质金属蛋白酶(MMP)-9抗体购自中国Solarbio公司，LipofectamineTM2000转染试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司，Transwell小室购自美国Corning公司，Annexin V FITC PI 细胞凋亡试剂盒购自上海拜力生物科技有限公司。

1.2细胞的培养与转染将EOMA冻存管置于37℃水浴锅中，迅速融化，离心，收集细胞，加入含10%FBS和青链霉素的DMEM培养基，置于5%CO2、37℃、95%湿度的孵箱中培养。待细胞的贴壁面积至70%～80%汇合时，使用2 ml 0.25%胰酶消化细胞，加入不完全DMEM培养基终止消化，磷酸盐缓冲液(PBS)清洗细胞3次，加入新鲜培养基，以1∶3的比例传代。……