12%甲维·茚虫威水乳剂高效液相色谱分析

2018-04-09王腾达张力卜李佳浩段小莉王佰涛

现代农药 2018年2期

王腾达，马　超，张力卜，李佳浩，段小莉，王佰涛，徐　军，陈　昶

（中国农业科学院植物保护研究所，北京中保绿农科技集团有限公司，北京　100193）

1984年，美国Merk公司对阿维菌素的4"-(α-1-齐墩果糖基)-α-1-齐墩果糖上的羟基进行了衍生化处理，得到了甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（emamectin benzoate）[1]。经实验发现其具有较好的杀虫和杀螨活性，遂作为一种新型高效抗生素类杀虫杀螨剂加以利用。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐，简称甲维盐，以发酵产品阿维菌素B1为原料合成而得，含有B1a和B1b组分，通常B1a组分质量分数大于90%。

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对鳞翅目害虫幼虫和螨类的活性极高，具有胃毒和触杀作用。其通过增强抑制神经递质（如谷氨酸盐和氨基丁酸）的作用，使大量氯离子进入神经细胞，影响细胞功能，扰乱正常神经传导，使昆虫瘫痪死亡[2]。

茚虫威（indoxacarb）是由美国杜邦公司在1992年开发，并于2001年登记上市的二嗪类杀虫剂[3]。

茚虫威的作用机制与目前各类杀虫剂作用机制均有差异，通过阻断钠通道，从而导致昆虫运动失调、停止取食、麻痹并死亡。茚虫威具有杀幼虫和杀卵作用，对各龄期的幼虫都有效，具有胃毒和触杀作用。

茚虫威有1个手性中心，存在S型和R型2种异构体，其中仅S型异构体有杀虫活性，但开发的产品多为R、S型混合外消旋体[4]。

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和茚虫威复配，可以减缓害虫、害螨的抗药性发展速度，另外，茚虫威起效慢、持效期长的特点可以和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐起效迅速、持效期短的特点形成互补，提高了防治效果[5]。

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和茚虫威单剂的分析方法国内已有报道[4,6]，但两者复配制剂的高效液相色谱分析方法尚未见报道。本方法采用梯度洗脱，同时检测12%甲维·茚虫威水乳剂中2种有效成分的质量分数。方法较为快速、简便，相对于等度洗脱，缩短了出峰时间，节约了成本。

1　实验部分

1.1　有效成分质量分数测定方法

1.1.1试剂和溶液

甲醇（色谱纯）；氨水（分析纯），北京试剂厂提供；水（新蒸2次蒸馏水）；甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样（≥99.0%）、茚虫威标样（≥98.0%），中国农业大学理学院提供；12%甲维·茚虫威水乳剂（2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐＋10%茚虫威），北京中保绿农科技集团有限公司生产。

1.1.2仪器

Waters E2695高效液相色谱仪；Waters 2489 UV/Visible检测器；岛津UV-1800紫外分光光度计；Waters Sunfire不锈钢色谱柱（150 mm×4.6 mm），内装C18填充物，粒径5μm；过滤器，滤膜孔径为0.45μm。1.1.3色谱操作条件

流动相A：甲醇；流动相B：0.08%氨水溶液（质量分数）。

梯度洗脱：0～6 min，80%A＋20%B（体积分数，下同）；6～8 min，80%A→92%A；8～11 min，92%A；11～13 min，92%A→80%A。流速：1.0 mL/min；进样量：5 μL；检测波长：240 nm；柱温：25℃。保留时间：茚虫威约5.4 min；甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1b约10.1 min，B1a约10.9 min，色谱图见图1、图2。

图1　标样色谱图

图2　甲维·茚虫威水乳剂色谱图

1.1.4溶液配制

称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐标样约0.025 g（精确至0.000 2 g）、茚虫威标样0.125 g（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超声15 min至标样完全溶解，用甲醇稀释至刻度，混匀制得标样溶液。

称取约含甲氨基阿维菌素苯甲酸盐0.025 g、茚虫威0.125 g的试样，置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超声15 min至样品完全溶解，用甲醇稀释至刻度，混匀制得试样溶液。

1.1.5测定

在1.1.3所述的色谱条件下，平衡色谱柱，待检测器基线稳定后，连续进数针标样溶液，计算各针相对响应值。待相邻2针响应值变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.1.6计算

试样中的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（或茚虫威）质量分数w1（%）按式（1）进行计算。

式中：A1—标样溶液中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（或茚虫威）色谱峰面积的平均值；A2—试样溶液中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（或茚虫威）色谱峰面积的平均值；m1—甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（或茚虫威）标样的质量（g）；m2—试样的质量（g）；P—标样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（或茚虫威）的质量分数（%）。

1.2　S-茚虫威的测定

1.2.1试剂和溶液

正己烷、异丙醇、乙醇（色谱纯）；水（新蒸2次蒸馏水）；S-茚虫威标样（≥81.0%），中国农业大学理学院提供。

1.2.2仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪，具可变波长紫外检测器；Agilent色谱工作站；色谱柱：不锈钢柱（250 mm×4.6 mm），内装CHIRALCEL OD-H填充物，粒径5 μm。

1.2.3色谱操作条件

检测波长：285 nm；流动相：V（异丙醇）∶V（乙醇）∶V（正己烷）=30∶10∶60；流速：0.8 mL/min；进样量：20 μL；柱温：25℃。保留时间：R-茚虫威约8.4 min，S-茚虫威约10.9 min。典型色谱图见图3、图4。

图3　S-茚虫威标样液相色谱图

图4　试样液相色谱图

1.2.4溶液的配制

称取S-茚虫威标样约0.010 g（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，先用适量乙醇溶解，再用流动相稀释至刻度，混匀制得标样溶液。

称取约含S-茚虫威0.010 g的试样于50 mL容量瓶中，先用乙醇溶解，再用流动相稀释至刻度，混匀制得试样溶液。

1.2.5测定

在1.2.3色谱条件下，平衡色谱柱，待检测器的基线稳定后，连续进数针标样溶液，计算各针相对响应值。待相邻2针响应值变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.2.6计算

试样中S-茚虫威的比例K，按式（2）计算。

式中：AS—试样溶液中S-茚虫威峰面积的平均值；AR—试样溶液中R-茚虫威峰面积的平均值。

试样中S-茚虫威质量分数w2（%）按式（3）计算。

2　结果分析与讨论

2.1　检测波长的选择

对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和茚虫威标样溶液分别进行紫外扫描，获得二者的紫外光谱图（图5）。在240 nm波长条件下，2种有效成分均有较强吸收，且杂质响应值小，流动相无吸收。因此，综合考虑多种因素，最终选定240 nm作为检测波长。

图5　紫外吸收谱图

2.2　流动相的选择

在甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、茚虫威质量分数检测中，最初选定以甲醇＋氨水溶液（体积比80∶20）为流动相进行等度洗脱，甲氨基阿维菌素苯甲酸盐出峰时间较长，且峰形不佳。经过实验，发现以甲醇＋氨水作为流动相，采取1.1.3中的梯度洗脱程序，可以缩短甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的出峰时间，且色谱峰峰形尖锐，可满足分析要求。

在S-茚虫威检测中，采用不同体积比的异丙醇＋乙醇＋正己烷作为流动相对试样进行分离检测。结果发现，异丙醇、乙醇和正己烷三者体积比为30∶10∶60时，分离效果最好，出峰时间短，且色谱峰尖锐。

2.3　分析方法的线性关系

称取一定质量的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和S-茚虫威标样，使用梯度稀释的方法配制不同质量浓度的标样溶液，在1.1.3色谱操作条件下测定相应响应值。以标样溶液的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和S-茚虫威的线性方程。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐线性方程为y=8 586.8 x-76 916，相关系数为0.999 9；S-茚虫威线性方程为y=5 602.0 x-304 240，相关系数为0.999 5。表明方法线性关系良好（见图6、图7）。