曹碗君，赵洁，乔慧莲，马斌芳，李臻

（第四军医大学基础部组织学与胚胎学教研室，西安 710032）

组蛋白甲基化是指发生在H3和H4组蛋白N端赖氨酸(lysine) (K)或者精氨酸残基上的甲基化，其中H3K4的甲基化与基因的激活相关，由组蛋白甲基转移酶介导催化。人类组蛋白H3K4甲基转移酶由以下3对复合物组成：SETd1A/SETd1B、MLL1/2和MLL3/4[1]。PTIP相关蛋白1（PTIP associated protein 1，PA1)首次由Young-Wook Cho等在研究MLL3/4复合体功能时发现，因为和Pax转录激活结构域相互作用蛋白（Pax transactivation-domain interacting protein，PTIP）关系密切，同为MLL3/4复合体内重要组成部分而得名；他们通过免疫共沉淀实验证实，PTIP和PA1只存在于MLL3/4复合体中[2]。人类PA1蛋白包含254个氨基酸，而小鼠PA1则由253个氨基酸序列构成，两者在氨基酸水平有87%序列一致。Jing Liang等采取Northern blot方法，对人心脏、脑、胎盘、肺、骨骼肌、肝脏和胰腺等器官进行了检测，发现这些器官中均存在PA1，说明PA1广泛表达在人体的各个器官[3]。然而，PA1在雄性生殖系统中的表达及其功能尚无报道。本文采用PCR、免疫组织化学染色以及荧光双标技术，检测PA1在小鼠睾丸发育过程中的表达及定位，为以后进一步深入探究其在雄性生殖系统中的功能及作用机制打下基础。

材料与方法

1 组织材料

SPF级C57小鼠，出生后 1w、2w、4w、8w、12w、18w及24w各4只，购自第四军医大学实验动物中心。2%苯戊巴比妥以45 mg/kg体重腹腔麻醉，取左侧睾丸用于提取RNA进行PCR分析，右侧睾丸取出后立即置于4%多聚甲醛中固定24h，石蜡包埋，切片（5μm）用于免疫组织化学染色。

2 主要试剂

RNA提取液Trizol plus，反转录试剂盒Prime ScriptTMRT reagent Kit, Premix Taq以及SYBR Primix Ex Taq均购自日本Takara公司。柠檬酸盐抗原修复液购自西安科昊生物有限公司。……