孙 佳，赵晓静，袁 翎，李雨濛，李 南，张中冕，王豪勋，韩 娜，马 军，王 健△

(1.郑州大学第二附属医院肿瘤科，河南郑州 450014；2郑州大学附属肿瘤医院/河南省肿瘤医院，河南郑州 450008；3郑州大学第二附属医院检验科，河南郑州 450014)

我国是食管鳞癌高发区，约90%的食管癌为鳞状细胞癌[1]，是第四大癌症死亡原因。放疗是食管癌的主要治疗方法之一， DNA双键断裂(DSBs)是放疗造成DNA损伤的主要类型。肿瘤细胞可通过同源重组(HR)和非同源末端连接(NHEJ)对DSBs进行修复[2]，降低放疗敏感性。真核细胞中DSBs主要由NHEJ修复，DNA-PKcs(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit)是NHEJ的中心因子，因此可通过抑制DNA-PKcs增加放疗敏感性。NU7441是一种新型的DNA-PKcs抑制剂，可抑制DNA-PKcs磷酸化[3]，从而抑制DSBs修复[4-5]。自噬是保守的细胞内过程。通过双层膜囊泡即自噬体与溶酶体融合，实现蛋白质和细胞器的降解。自噬在肿瘤发生发展过程中可能具有抗肿瘤和促进肿瘤发生的双重作用[6-7]。药物及放射照射可造成肿瘤细胞DNA损伤，并促进肿瘤细胞自噬现象，但自噬在DNA损伤、细胞死亡和增殖中的作用存在争议[8-10]。本研究用X射线照射诱导EC109细胞DNA断裂，用DNA-PKcs抑制剂NU7441抑制肿瘤细胞DSBs的自我修复过程，检测自噬蛋白表达，探讨阻断食管鳞癌细胞DNA修复对其自噬过程的影响。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 食管鳞癌细胞系EC109为郑州大学第二附属医院消化疾病研究所保存；RMPI-1640细胞培养基、胎牛血清(FBS)、青链霉素混合液购于上海生工公司；磷酸化DNA-PKcs(ab18192)购于英国Abcam；总DNA-PKcs(4602S)、Beclin-1(3495S)、LC3B(2775S)、HRP标记的羊抗兔IgG(7074S)购于美国Cell Signaling Technology；凋亡检测试剂盒购于美天旎公司(130-092-052)。

1.2方法

1.2.1细胞培养和处理 EC109细胞用RPMI1640培养基(含10%胎牛血清、1%青链霉素)，培养于37 ℃，5% CO2培养箱。……