陈益耀 陈 轶 何周桃 巫华志

海南省人民医院消化内科 (海南 海口， 570311)

氧化应激是非酒精性脂肪性肝病的病因中重要的“二次打击”因素。课题组在前期的研究中发现，益智仁乙酸乙酯提取物能够通过抗氧化应激而达到防治非酒精性脂肪肝的作用。鉴于益智仁乙酸乙酯部中含有丰富的原儿茶酸及白杨素，而原儿茶酸及白杨素有抗氧化活性，故在细胞水平观察原儿茶酸及白杨素对非酒精性脂肪肝细胞模型的保护作用。

1 材料和方法

1.1 材料 细胞株：人正常肝细胞株L02，受赠于湘雅二院中心实验室。仪器设备：生物安全柜(型号：Sterile 90)；二氧化碳恒温培养箱(型号：AR-3100G)；酶联检测仪(型号：DG5031)；倒置相差显微镜(型号：Mitutoyo MF)。 药物及试剂：胎牛血清(四季青)；1640培养基(Hyclone)；青霉素-链霉素溶液(Hyclone)；ALT试剂盒、AST试剂盒、TG试剂盒、MDA试剂盒、SOD试剂盒、GSH-Px试剂盒、4%多聚甲醛固定液均购买自南京建成科技有限公司。白杨素标准品(北京索莱宝生物科技有限公司)。

参照文献方法提取益智仁中的原儿茶酸：95%乙醇浸泡益智仁粉后提取，经用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集乙酸乙酯部。100～140目硅胶柱层析，同时进行细胞活性实验，将有活性组分溶解于甲醇，Sephadex LH-20凝胶层析，经甲醇洗脱得到原儿茶酸。

1.2 方法 L02细胞复苏、培养：将L02细胞冻存管置于预热的水浴箱，冻存液融化后，将细胞转移至无菌离心管，加入细胞培养基，吹打、混匀后离心5分钟。弃去上清液，加培养液轻吹、混匀后接种于培养瓶内，放入培养箱(37℃、5%CO2)进行培养。

细胞传代：弃去培养液，PBS液冲洗细胞2遍，弃去PBS液，加入0．25%胰蛋白酶消化。……