李 萌，李 雪，郑志强

（河北农业大学，河北 保定 071000）

实时荧光定量简称PCR。该技术以PCR技术为基础进行改进得到的更加快速、灵敏、特异的核算定量技术，有着光谱高敏感性以及定量精确等特点，可以对PCR中荧光信号变化进行直接探测，从而得到定量结果。为进一步加强对该技术研究及应用，本文将针对其原理、特点及应用前景进行探讨。

1 原理

Ct是荧光定量PCR技术中重要的一个值，代表着每个反应管内荧光信号在达到设定阈值过程中所需要经历循环数。在进行荧光定量PCR反应中需要加入特定波长的荧光染料或者基团，然后通过仪器对荧光物质进行监测，得到其积累信号即为PCR反应进程，从而定量定性分析起始模板。PCR反应产物随着PCR反应的进行而不断积累，同时荧光信号强度也会不断呈正比增加。荧光强度信号随着每个循环的完成而不断收集，从而通过荧光强度变化对产物量的变化进行监测，进而将结果绘制成扩增曲线图。

2 实时荧光定量PCR的检测方法

SYBR Green I检测。SYBR Green I是一种燃料，具有绿色激发波长，能够和dsDNA小沟部位相结合，不过期绿色激发波长只有在和dsDNA结合后方可发光。变性过程中DNA的双链分开，此时荧光不会发生；复性和延伸过程中会形成dsDNA此时SYBR Green I会与之结合并有绿色荧光出现。因此，扩增产物的数量可以根据荧光强度反应出来。

TaqMan探针。常规TaqMan探针的5'端对荧光发射基团FAM（6-羧基荧光素）进行标记，3'端对荧光淬灭基团TAMRA（6-羧基四甲基若丹明）进行标记。在PCR过程中，该探针无法实现延伸。……