徐振宇，杨立明，李广平，张艳梅

(唐山市工人医院，河北唐山 063000)

慢性心力衰竭(CHF)是各种原因导致的心脏泵血和(或)充盈功能降低，是各类心脏疾病的终末阶段[1]。有报道显示，世界范围内CHF患病率为1.5%～2.0%，病死率高达5.6%～15.4%[2]。近年来随着我国人口老龄化， CHF患病率呈逐年升高趋势[2]。目前CHF发病机制仍未完全明确，临床上对其多采用对症治疗，但无法改善患者预后。大量研究显示，CHF的本质是心肌重构，早期发现并逆转心肌重构是提高CHF治疗效果的关键[3，4]。国外有研究发现，miR-133在CHF发生、发展中起重要作用[5]，但miR-133与CHF患者心室重构、心功能改变的关系尚不明确。miR-133包括miR-133a、miR-133b，主要在心肌和骨骼肌中表达[6]。本研究探讨miR-133a、miR-133b与CHF患者心功能和心肌重构的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年9月～2017年9月我院收治CHF患者132例。纳入标准：①均符合慢性心力衰竭诊断治疗指南[7]；②心力衰竭症状持续时间超过6个月；③左室射血分数(LVEF)<45%；④男性患者左室舒张末期内径(LVEDD)>55 mm，女性患者LVEDD>50 mm。排除标准：①伴有心脏瓣膜病、阻塞性肺疾病以及肺动脉栓塞者；②合并肝、肾等脏器功能严重障碍者；③入院前30 天内接受经皮冠脉介入术治疗者；④急性心肌梗死者。纳入患者男71例、女61例，年龄38～76(61.22±8.46)岁。美国纽约心脏病协会心功能(NYHA)分级Ⅰ～Ⅱ级43例，Ⅲ级52例，Ⅳ级37例。本研究已获医院医学伦理委员会批准，纳入患者均签署知情同意书。

1.2 相关指标观察 ①血清miR-133a、miR-133b：采用实时荧光定量PCR法。采用TRIzol总RNA提取试剂盒(北京雷根生物技术有限公司生产)提取总RNA，紫外分光光度计检测样品纯度为合格样品(A260/A280≥1.8～2.0)。逆转录试剂盒(大连宝生物公司生产)获取模板cDNA，实时荧光定量PCR试剂盒(宝生物公司生产)行实时荧光定量PCR。miR-133a、miR-133b以及内参U6引物购自上海生工公司，引物序列：miR-133a上游引物5′-GCCAAGCTGGTAAAAATGGAA-3′，下游引物5′-TATGGTTTTGACGACTGTGTAT-3′；miR-133b上游引物5′-TTTGGTCCCCTTCAACCAGCTA-3′，下游引物5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′；内参U6上游引物5′-CGCAAGGATGACACGCAAATTC-3′，下游引物5′-GTGCAGGGTCCGA-3′。PCR反应条件：92 ℃ 60 s，92 ℃ 60 s，56 ℃ 30 s，74 ℃ 30 s，重复36个循环。以2-ΔΔCt法计算miR-133a、miR-133b相对表达量。重复3次，取平均值。②心功能和心室重构指标：采用Philips iE33超声检测仪行二维与三维超声心动图检查，检测心功能指标LVEF、心输出量(CO)及心室重构指标LVEDD、左心房内径(LAP)、左心室后壁厚度(LVPW)、左室质量指数(LVMI)、左室重构指数(LVRI)。采用Pearson相关性分析法分析血清miR-133a、miR-133b相对表达量与心功能及心室重构指标的关系。

2 结果

2.1 不同心功能分级者血清miR-133a、miR-133b相对表达量比较 血清miR-133a、miR-133b表达量随心功能NYHA分级升高而升高(P均<0.05)。见表1。

表1 不同心功能分级者血清miR-133a、miR-133b相对表达量比较

注：与Ⅰ～Ⅱ级比较，*P<0.05；与Ⅲ级比较，#P<0.05。

2.2 不同心功能分级者心功能及心室重构指标比较 不LVEDD、LAP、LVPW、LVMI随心功能NYHA分级升高而升高，LVRI、CO、LVEF随心功能NYHA分级升高而降低(P均<0.05)。见表2。

表2 不同心功能分级者心功能及心肌重构指标比较

注：与Ⅰ～Ⅱ级比较，*P<0.05；与Ⅲ级比较，#P<0.05。

2.3 血清miR-133a、miR-133b相对表达量与心功能及心室重构指标的关系 相关性分析结果显示，miR-133a、miR-133b相对表达量与CO、LVEF均呈负相关(r分别为-0.584、-0.622，-0.477、-0.514，P均<0.05)，与LAP、LVPW、LVMI均呈正相关(r分别为0.724、0.638，0.681、0.611，0.596、0.573，P均<0.05)；与LVEDD、LVRI无关(P均>0.05)。

3 讨论

心肌重构是机体对损伤的一种适应性反应。CHF发生时心功能逐渐恶化，左心室排出血液无法满足身体需要，引起神经、内分泌等多个系统代偿性变化，心肌细胞外胶原异常沉积、炎症细胞浸润、细胞信号异常等，最终引起心肌重构[8]。CHF患者心功能分级升高心肌重构逐渐加重。miRNA是一类由22～25个核苷酸组成的单链非编码小分子RNA，在体内发挥多种生物学功能，且在人体内的表达具有严格的细胞、组织以及发育阶段特异性[5]。miRNA可与靶mRNA 3′非编码区结合，起到调节基因表达的作用。近年研究发现，心肌重构小鼠血清miR-133水平明显升高[9]；研究发现，心肌梗死后出现左心室心肌重构的患者血浆miR-133a水平明显升高，其水平与左室重构存在密切关系[10，11]。

本研究结果显示，CHF患者血清miR-133a、miR-133b相对表达量随心功能分级升高而升高，与何巧等[12]和冯俊等[13]的研究报道相符。证实CHF患者血清miR-133存在明显高表达，且随病情加重而升高。提示miR-133a与miR-133b可能参与了CHF病程的进展，并有望作为判断心衰患者病情严重程度的血清学指标。本研究Pearson相关性分析结果显示，CHF患者血清miR-133a、miR-133b相对表达量与心功能指标CO、LVEF呈负相关，进一步提示CHF患者血清miR-133a、miR-133b与心功能的密切关系。

LVEDD、LVPW分别反映左心室、左心房壁的厚度[14，15]，LAP、LVMI、LVRI反映患者心肌重构的整体情况。本研究结果显示，CHF患者血清miR-133a、miR-133b相对表达量与LAP、LVPW、LVMI均呈正相关，提示血清miR-133a、miR-133b与CHF患者心室重构密切相关。临床可通过检测血清miR-133a、miR-133b判断患者心室重构情况。

目前miR-133参与CHF发病的机制仍未明确。有研究显示，miR-133可与RhoA基因转录产物的3′非编码区结合，导致RhoA基因表达降低、心肌纤维合成降低[16]；miR-133可导致细胞分化周期蛋白42表达降低，结缔组织生长因子表达升高，细胞异常增殖，心肌纤维重排[17]。本研究未涉及此内容，miR-133参与CHF心室重构的具体机制有待于进一步研究。本研究结果为CHF的分子靶向治疗提供了新的方向。本研究的不足为样本量较少，可能导致研究结果发生一定程度的偏倚。

[1] 张东明.慢性心力衰竭患者血清CA125表达水平与心肌重构心功能的相关性分析[J].浙江临床医学,2015,17(7):1222-1224.

[2] 杨薪,刘映峰,王世祥,等.瑞舒伐他汀对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞骨保护素和核因子κB受体活化因子配体的影响[J].中华老年心脑血管病杂志,2014,16(11):1192-1195.

[3] 冯俊,李树生,陈华文,等.基于对miR-133的调控探讨丹参酮ⅡA影响钙调神经磷酸酶介导的心肌肥厚的作用机制[J].中国中医急症,2016,25(3):377-379.

[4] 张海伶,马春华,马骁,等.不同剂量辛伐他汀联合曲美他嗪对慢性心力衰竭患者血清hs-CRP以及心功能的影响[J].医学综述,2016,22(23):4736-4739.

[5] Pisano F, Altomare C, Cervio E, et al.Combination of miRNA499 and miRNA133 exerts a synergic effect on cardiac differentiation[J].Stem Cells, 2015,33(4):1187-99.

[6] Shi L, Xie Y, Liao X, et al. Erratum to: Shenmai injection as an adjuvant treatment for chronic cor pulmonale heart failure: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials[J]. BMC Complement Altern Med, 2015,15(1):429-429.

[7] 中华医学会心血管病学分会,中华心血管病杂志编辑委员会.慢性心力衰竭诊断治疗指南[J].中华心血管病杂志,2007,35(12):1076-1095.

[8] 胡大一,黄德嘉,袁祖贻,等.盐酸伊伐布雷定治疗中国慢性心力衰竭患者的有效性及安全性评价:SHIFT研究中国亚组数据分析[J].中华心血管病杂志,2017,45(3):190-197.

[9] 王学工,张雪梅.补肾通脉汤对慢性心力衰竭患者血浆脑钠肽、肾素活性及血管紧张素Ⅱ水平的影响[J].国际中医中药杂志,2014,36(12):1071-1073.

[10] 殷华,马少雯,杜一平,等.生长分化因子-15对慢性心力衰竭患者左室重构的预测价值[J].中华老年多器官疾病杂志,2017,16(9):659-662.

[11] 张飞飞,党懿,齐晓勇,等.心脏收缩力调节对慢性心力衰竭兔心肌重构的影响[J].中国循环杂志,2017,32(4):384-389.

[12] 何巧,黄勇.左心衰竭患者血清 MR-ProANP、NT-ProBNP 含量与泵血功能、心室重构的相关性研究[J].海南医学院学报,2017,23(2):201-204.

[13] 冯俊,陈华文.丹参酮ⅡA 通过调节 miR-133水平对慢性心力衰竭心肌重构的影响[J].现代中西医结合杂志,2016,25(8):803-806.

[14] 段婷婷.肌细胞特异性microRNAs对收缩舒张生物学效应调控机制的研究进展[J].复旦学报(医学版),2017,44(3):385-391.

[15] 张雪莲,原芳.微小 RNA-133在慢性心力衰竭患者血清中表达及与心肌重构和心功能的相关性[J].安徽医药,2016,20(10):1879-1881.

[16] Chen S, Puthanveetil P, Feng B, et al. Cardiac miR-133a overexpression prevents early cardiac fibrosis in diabetes[J].J Cell Mol Med, 2014,18(3):415-21.

[17] Borovkova NJ, Borovkov NN, Kuznecova TE, et al. Therapy of arterial hypertension in patients with chronic heart failure and signs of chronic kidney disease with fixed perindopril/amlodipine combination[J]. Kardiologiia, 2015,55(6):22-26.