辛 艳，刘 何，常雪艳，周 莹

（天津市种子管理站，天津 300061）

近年来，随着转基因农作物商品化推广进程加快，农业部和各省市种子质量监管部门下达的抽查监督检验任务都要求进行转基因成分的定性检测。因此，省级以上种子检测机构需要加快建立大批量农作物种子样品转基因检测技术平台，为转基因农作物市场监管提供技术保障。目前，实时荧光PCR定性检测法已逐步列为农业和出入境检验检疫部门的行业标准，并逐步成为各级转基因检测机构重要方法。

1 TaqMan探针技术在转基因成分检测方面应用原理

TaqMan探针技术是美国Perkin Elmer(PE)公司研制的一种实时PCR定量技术[1]。TaqMan探针技术应用于转基因成分检测，是根据使用频率最高的筛选基因即启动子、终止子等调控元件或外源基因作为检测靶标，设计特异性引物和荧光探针，在对样品DNA进行PCR扩增的过程中，实时荧光定量PCR仪根据荧光信号的积累与PCR扩增产物形成同步的关系实时监测整个PCR进程，再通过扩增曲线对检测模板DNA进行定性分析，判定样品中是否含有外源基因[2]。

2 TaqMan探针技术特点

TaqMan探针技术融汇了PCR灵敏性、DNA杂交的特异性和光谱定量的准确性，将荧光标记技术、激光技术、数码显像技术融为一体，具有特异性和准确性强、灵敏度高、假阳性低、重复性好、定量范围宽、检测效率高等特点。另外，实时定量PCR仪操作简单、安全、自动化程度高，PCR扩增和检测在全封闭的同一反应管内进行，能有效减少核酸扩增产物的交叉污染，而且扩增和检测一步完成，不需要电泳等PCR后期处理，更避免了电泳染色剂EB、放射性同位素或挥发性有害物质如甲醛等对检测人员的伤害[3]。……