丁卫星，王荣谈，李春华，，夏 叶，郭佳宏，倪建平，缪德年，*，赵 敏*

（1上海瑞丰农业科技有限公司，上海201106；2上海市农业科学院上海种猪工程技术研究中心，上海201106；3上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海201106；4上海佳牧生物制品有限公司，上海201106）

猪流行性腹泻是一种由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的，以严重的肠炎、腹泻、呕吐、脱水和仔猪高死亡率为显著特征的猪急性高度接触性肠道传染病［1］。自2010年底中国猪流行性腹泻疫情暴发以来，该病持续在中国流行蔓延，给养猪生产带来了巨大的经济损失，直至2015年中国部分地区的猪场仍然发病严重［2-4］。PEDV基因组全长为28 033 nt，编码4种主要结构蛋白［纤突蛋白（Spike protein，S）、小包膜蛋白（Envelope，E）、膜糖蛋白（Membrane，M）、核衣壳蛋白（Nucleocapsid，N）］和4种非结构蛋白（1a、1b、3a、3b）。其中M蛋白（27—32 kD）在病毒囊膜蛋白中含量最多，并通过与S蛋白和N蛋白互作参与病毒的组装。M蛋白具有跨膜结构，短的N末端结构域位于病毒外，C端结构域在病毒内［1］。在补体存在的条件下，M蛋白可诱导机体产生中和抗体，而且M蛋白还可以诱导α干扰素的产生［5］。本研究克隆了发病猪群临床分离株PEDV D1和D3的M基因序列，并分析目前我国PEDV流行毒株M蛋白的抗原性，以期为PEDV疫情诊断方法的建立和防控提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

PEDV临床毒株D1和D3分离自具有腹泻临床症状的仔猪。大肠杆菌JM109感受态细胞、pMD18-T载体、RNA提取试剂盒、高保真Prime STAR HSDNA聚合酶、DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒、DL 2000 DNA Marker、质粒小量提取试剂盒均为宝生物工程（大连）有限公司产品。

1.2 引物

从GenBank中下载近年来流行的PEDV M基因核苷酸序列，经比对后根据其保守序列设计1对引物，用于 M基因的扩增。……