车 明 月， 穆 贤， 李 学 一， 张 齐， 丛 丽 娜， 牛 庆 昌， 李 成

( 大连工业大学 生物工程学院, 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

自由基是机体正常代谢的产物，参与生物体的多种生化过程，如胞内信号转导、细胞生长、免疫、防御等[1-3]。过多的自由基可造成生物膜脂质过氧化损伤，DNA/RNA/氨基酸氧化交联，从而破坏其具有的结构或功能[7]。直接补充外源性抗氧化酶(SOD、CAT)能有效帮助机体清除过多的活性氧，减轻或阻止氧化损伤[8-10]。

海参能很好地抵御氧化胁迫型环境带来的氧化损伤，其超氧化物歧化酶(SOD1)是机体自身抗氧化损伤的重要组成部分[9-11]。研究海参种属SOD1具有很高的开发前景和应用价值；同时，作为辽宁省重要的海产养殖经济物种，研究开发海参SOD1，可以很好地提高其经济附加值。实验利用体外重组表达的Aj-SOD1，并检验其活性，以期为深入研究Aj-SOD1性质提供理论基础。

1 材料和方法

1.1 材 料

1.1.1 海参来源及处理

海参采购于大连新长兴海参市场。在实验室条件下，对海参进行饥饿处理3～5 d，清空肠组织。

1.1.2 菌种与试剂

大肠杆菌DH5α、BL21(DE3)，本实验室保存。质粒提取试剂盒，北京天根生化科技有限公司；Protein markers，大连宝生物有限公司；Ni2+-NTA 亲和层析填料，GE healthcare公司；其他试剂均为国产分析纯。

1.2 方 法

1.2.1 提取海参肠组织总RNA

采用Trizol法提取海参肠组织的总RNA。1.5%的琼脂糖凝胶电泳验证RNA提取情况。

1.2.2 反转录cDNA第一链

参照反转录试剂盒使用说明，以海参肠组织总RNA为模板，反转录获得cDNA第一链。

以反转录产物为模板，采用Aj-β-actin 特异性引物：P1-AGTATTTCCTCTCTCTGGTGGAGCG和P2-TCATCACCATTGGCAACGAAAGGT扩增海参β-actin基因片段(278 bp)，琼脂糖凝胶电泳验证后，检测反转录后的结果。……