王晋 黄海涛 刘欣 许永 李晶 孔维松 张涛 张承明 杨光宇 李雪梅

摘要：建立超高效液相色谱法快速测定烟草中植物色素（新黄质、紫黄质、叶黄素、叶绿素-a、叶绿素-b、β-胡萝卜素）检测方法。90%丙酮超声萃取30 min，色谱柱为Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），流动相为乙腈-水梯度洗脱，以体积比按（乙腈90%+10%水），4.0 min（100%乙腈）的梯度条件，流速为0.8 mL/min，用二极管阵列检测器检测。6种色素在5 min内分离，检测限15～22 ng/mL，平均回收率为93%～105%。采用自主设计的样品萃取瓶进行前处理，前处理简单快速，同时，色谱分离周期明显缩短，与目前行业标准相比，样品分析效率提高了4倍以上。

关键词：超高效液相色谱;烟草;植物色素;快速测定

中图分类号：O656.3         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2018）22-0124-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.22.034           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Abstract： Established a ultra performance liquid chromatography（UPLC） method for the rapid determination of plant pigments（neoxanthin，violaxanthin，lutein，chlorophyll-a，chlorophyll-b and β-carotene） in tobacco. The plant pigments were extracted from samples with 90% acetone by ultra-sonic extraction. Then，the plant pigments were separated by Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm） column， with and water mixture as mobile phase at a flow-rate of 0.8 mL/min. It eluted with gradient elution （90% V（acetonitrile））+10% V（water）） at the beginning，then the gradient elution replaced by acetonitrile 4 min later. These plant pigments were detected by diode array detector. Under the optimal conditions，6 kinds of plant pigments could be effectively separated within 5 min. The limits of detection（LODs） of 6 kinds of plant pigments were 15～22 ng/mL and the average recoveries were in the range of 93% to 105%. Via the self-designed sample extraction bottle using for pretreatment，and improved chromatography conditions，this method efficiency was enhanced 4 times than the current tobacco standard.

Key words： ultra performance liquid chromatography; tobacco; plant pigments; rapid determination

植物色素是煙草生长和利用太阳能进行光合作用的重要物质，同时也是影响烟草品质的重要成分，它们对烟叶的色泽和香味也有着重要影响[1-4]。在烟叶调制过程中，叶绿素类化合物的降解是评价烟叶调制好坏的重要指标，类胡萝卜素是烟草中重要的香气前体化合物，许多烟草特征香气成分，如β-大马酮、巨豆三烯酮、二氢猕猴桃内酯等均是类胡萝卜素降解产物[1-5]。因此，烟草中植物色素的准确测定对烟草质量评价具有重要的意义。烟草色素的测定通常采用分光光度法、近红外光谱法和高效液相色谱法，其中分光光度法准确性较差，而近红外光谱法只能进行1种半定量的预测[4-7]。传统的液相色谱法由于分离效率高、选择性好、检测灵敏度高、操作自动化，在烟草植物色素分析中得到了广泛应用[6，7]。……