燕 杰，蒋 琪

(天津医学高等专科学校， 天津 300222)

在全球范围内，肺癌是发病率和病死率增长最快、对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，肺癌分别占男性和女性癌症的17%和9%[1]，造成了约19%的癌相关死亡。深入了解肺癌的发生发展机制，寻找新的治疗靶点，对于肺癌的早期发现和诊断以及提高治疗效果有着非常重要的意义。有报道，孕激素和脂联素分子受体3(progestin and adipoQ receptor 3，PAQR3)在前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌和胃癌等多种肿瘤中表达降低[2- 3]，而且在肿瘤形成、生长和转移等过程中发挥了抑制作用。但是，关于PAQR3在肺癌中的相关研究还比较少。因此，本文对肺癌组织中PAQR3的表达情况进行了检测和分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病例:选取40例不同年龄、不同性别已经接受过外科手术，但未接受过任何放疗和化疗的肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织石蜡标本，收集标本时间为2015-2016年，其中男26例，女14例；年龄42～78岁，平均年龄55.6岁。

1.1.2 试剂:PAQR3和β-actin引物(上海生工生物工程股份有限公司)，总RNA提取试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)，RevertAid第一链cDNA合成试剂盒(Thermo Scientific公司)，UltraSYBR Mixture(北京康为世纪生物科技有限公司)，PAQR3抗体(Abcam公司)，β-actin抗体和二抗(博士德生物工程有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 Real-time RT-PCR检测PAQR3 mRNA表达:取50 mg组织，在研钵中研磨，研磨期间不断加入液氮，随后提取总RNA，NanoDrop2000测定RNA浓度及A260/A280比值(1.8～2.0)后进行反转录。设计real-time RT-PCR引物，并通过NCBI blast检测其特异性。PAQR3引物：5′-AACCCGTACAT CACCGACG-3′(F)，5′-TCTGGACGCACTTGCTGAAG-3′(R)；β-肌动蛋白(β-Actin)引物：5′-CATGTACGTTGCTATC CAGGC-3′(F)，5′-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3′(R)。反应体系50 μL：2×UltraSYBR Mixture 25 μL，模板DNA 2 μL，上下游引物各1 μL，双蒸水21 μL。反应条件：95 ℃ 10 min,95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40个循环；95 ℃ 15 s；60 ℃ 1 min,95 ℃ 15 s,60 ℃ 15 s。

1.2.2 Western blot检测PAQR3蛋白表达:取50 mg组织，匀浆后提取总蛋白，用BCA法测定……