孔 静，田平平，李圆圆，石明隽，王圆圆，肖 瑛，张 帆，郭 兵，孙 兰

(1.贵州医科大学 病理生理学教研室, 贵州 贵阳 550025； 2.贵州省高校重大疾病发病机制及药物防治特色重点实验室,贵州 贵阳 550025； 3.江苏医药职业学院 病理学与病理生理学教研室, 江苏 盐城 224005)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病(diabetic mellitus, DM)最严重的并发症之一，是导致慢性肾衰竭的重要原因。肾小管间质纤维化是慢性肾衰竭的重要病理改变[1]，而肾小管上皮细胞向间充质细胞的转分化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)在肾小管间质纤维化的发生发展中起着重要作用[2]。Wnt通路是诱导EMT发生的一条重要的信号通路，本课题组的前期研究和其他学者的研究证实Wnt信号通路的活化促进了单侧输尿管梗阻大鼠和糖尿病大鼠肾脏纤维化的发生发展过程。分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled-relatd proteins, SFRPs)是Wnt通路的拮抗因子之一。DN时WNT4/β-catenin信号通路的异常活化是否与该通路的抑制因子SFRPs表达下调有关，目前研究甚少。因此，本研究旨在探索DN时WNT4/β-catenin信号通路相关分子及SFRP1的表达变化及其与DN肾纤维化的可能关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物:SD大鼠，雄性，体质量200 g±20 g，SPF级，16只(北京华阜康生物科技股份有限公司，质量合格证号：0257330)。

1.1.2 主要试剂:链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)(Sigma公司)；两步法免疫组化检测试剂、 辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG、DAB显色试剂盒(北京中杉金桥公司)；BCA蛋白浓度测定试剂盒、一抗稀释液和超敏ECL化学发光显示剂(北京碧云天公司)；过硫酸铵(APS)(武汉博士德公司)；0.45 μm PVDF膜(Millipore公司)；Tween- 20(北京索莱宝生物公司)；RevertAidTNTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo公司)；iQTMSYBR～Green Supermix(Bio-Rad公司)；WNT4抗体(北京博奥森公司)；……